1.一種反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒，包括引物、探針和FRET-PCR標準品，
其特征在于：所述引物為上游引物和下游引物；所述探針為6-FAM探針和Cy5探針；
所述上游引物具有SEQIDNo.1的核苷酸序列；
所述6-FAM探針具有SEQIDNo.2的核苷酸序列；
所述Cy5探針具有SEQIDNo.3的核苷酸序列；
所述下游引物具有SEQIDNo.4的核苷酸序列。
2.根據(jù)權利要求1所述的反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒，其特征在于：所述
試劑盒包括：引物、6-FAM探針、Cy5探針、PCR緩沖液、熱啟動Taq酶、dNTP、FRET-PCR
標準品、PCR陰性對照；所述PCR陰性對照為雙蒸水。
3.根據(jù)權利要求2所述的反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒，其特征在于:所
述FRET-PCR標準品是由所述的FRET-PCR的引物和探針對質粒標準品DNA模板進行擴增獲
得的擴增核苷酸片段插入pUC57載體構建而成的重組質粒。
4.根據(jù)權利要求3所述的反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒，其特征在于：所
述質粒標準品DNA模板的濃度為104/μl。
5.一種反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒的PCR擴增體系,其特征在于：所述實
時熒光定量FRET-PCR擴增對象包括質粒標準品DNA模板、PCR陰性對照；
所述實時熒光定量FRET-PCR擴增檢測體系包括20μl的擴增體系：10μl的樣品
DNA模板或者定量標準試劑、1xPCR緩沖液、1μM如權利要求1所述的上游引物、1μM如
權利要求1所述的下游引物、0.2μM如權利要求1所述的6-FAM探針、0.2μM如權利要求
1所述的Cy5探針、2個單位的商業(yè)化Taq酶和200μMdNTP。
6.一種反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒的PCR擴增體系,其特征在于：所述反
轉錄PCR擴增對象包括標準品質粒標準品DNA模板、RNA提取的陰性對照和PCR陰性對照；
所述反轉錄PCR擴增檢測體系包括20μl的擴增體系：10μl的樣品DNA模板或者
定量標準試劑、1xPCR緩沖液、1μM如權利要求1所述的上游引物、1μM如權利要求1所
述的下游引物、0.2μM如權利要求1所述的6-FAM探針、0.2μM如權利要求1所述的Cy5
探針、2個單位的商業(yè)化Taq酶、200μMdNTP、0.14個單位的商業(yè)化反轉錄酶和20個單位
的商業(yè)化RNA酶抑制劑。
7.一種反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒的檢測方法，其特征在于：在使用如
權利要求1所述的反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒時，其PCR擴增設置反應條件包
括：預變性、18個溫度遞減的高嚴謹循環(huán)、40個欠嚴謹?shù)臒晒猥@得循環(huán)、1個持續(xù)熒光獲得的
熔解循環(huán)和1個降溫循環(huán)；預變性：1x2min95℃；18個溫度遞減的高嚴謹循環(huán)：
6x1sec95℃，12sec70℃，8sec72℃；9x1sec95℃，12sec68℃，8sec72℃；3x
1sec95℃，12sec66℃，8sec72℃；40個欠嚴謹?shù)臒晒猥@得循環(huán)：40x1sec95℃，
8sec56℃，在此收集熒光，30sec67℃，和30sec72℃；1個熔解循環(huán)：1x1sec95℃，
10sec38℃，85℃持續(xù)收集熒光；降溫循環(huán)：1x1sec38℃。
8.一種所述的反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒的檢測方法，其特征在于：在使
用如權利要求1所述的反轉錄PCR檢測和分型登革病毒的試劑盒時，其PCR擴增設置反應條
件包括：反轉錄、預變性、18個溫度遞減的高嚴謹循環(huán)、40個欠嚴謹?shù)臒晒猥@得循環(huán)和1
個降溫循環(huán)；
反轉錄：1x30min55℃；預變性：1x2min95℃；18個溫度遞減的高嚴謹循環(huán)：
6x1sec95℃，12sec70℃，8sec72℃；9x1sec95℃，12sec68℃，8sec72℃；
3x1sec95℃，12sec66℃，8sec72℃；40個欠嚴謹?shù)臒晒猥@得循環(huán)：40x1sec95℃，
8sec56℃，在此收集熒光，30sec67℃,和30sec72℃；降溫循環(huán)：1x1sec38℃。
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