本發(fā)明公開了一種檢測狂犬病毒的熒光定量PCR試劑盒及應(yīng)用，該試劑盒含有：a)RNA抽提液、b)逆轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)液、c)逆轉(zhuǎn)錄酶、d)RNA酶抑制劑、e)引物和TaqMan探針、f)標(biāo)準(zhǔn)陽性DNA模板、g)PCR熒光定量反應(yīng)液，其特征是：引物序列分別為正義引物：5′-TAGGATGCTATATGGGTCAAGTCAGA-3′，反義引物：5′-TTCAAATGTCCCTTTCCCGAAGAA-3′，擴增子大小為125bp，熒光探針序列為：5′-FAM-CAACGGTTATTGCTGCATGTGCTCCTCA-TAMRA-3′，探針的5’端標(biāo)記熒光發(fā)射基團FAM，3’端標(biāo)記熒光淬滅基團TAMRA，標(biāo)準(zhǔn)陽性DNA模板由已插入狂犬病毒N蛋白區(qū)391bp片段的pGEM-T載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，增殖后提取質(zhì)粒，并于紫外分光光度計測A定量并10倍梯度稀釋。高效方便地對血清制品中的狂犬病毒的污染進(jìn)行實時監(jiān)控，還能為相關(guān)基礎(chǔ)研究提供技術(shù)支持，應(yīng)用前景十分廣泛。

1.一種檢測狂犬病毒的熒光定量PCR試劑盒，該試劑盒含有：a)RNA抽提液、b)逆轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)液、c)逆轉(zhuǎn)錄酶、d)RNA酶抑制劑、e)引物和TaqMan探針、f)標(biāo)準(zhǔn)陽性DNA模板、g)熒光定量PCR反應(yīng)液，其特征在于：引物序列分別為正義引物：5′-TAGGATGCTATATGGGTCAAGTCAGA-3′，反義引物：5′-TTCAAATGTCCCTTTCCCGAAGAA-3′，擴增子大小為125bp，熒光探針序列為：5′-FAM-CAACGGTTATTGCTGCATGTGCTCCTCA-3′，探針的5’端標(biāo)記熒光發(fā)射基團FAM，3’端標(biāo)記熒光淬滅基團TAMRA，標(biāo)準(zhǔn)陽性DNA模板由已插入狂犬病毒N蛋白區(qū)391bp片段的pGEM-T載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，增殖后提取質(zhì)粒，并于紫外分光光度計測A₂₆₀定量并10倍梯度稀釋。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測狂犬病毒的熒光定量PCR試劑盒，其特征是：所述的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液是由5×buffer，10μmol/L的反義引物、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、10mM?dNTPs和無RNA酶的滅菌雙蒸水組成。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測狂犬病毒的熒光定量PCR試劑盒，其特征在于：所述的熒光定量PCR反應(yīng)液是由2×Premix、10μmol/L的正義引物和反義引物、10μmol/L熒光探針和無菌雙蒸水組成。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測狂犬病毒的熒光定量PCR試劑盒，其特征是：所述的標(biāo)準(zhǔn)陽性模板DNA核苷酸序列為：TAGGATGCTATATGGGTCAAGTCAGATCCCTAAATGCAACGGTTATTGCTGCATGTGCTCCTCATGAAATGTCTGTTCTAGGGGGCTATCTGGGAGAGGAATTCTTCGGGAAAGGGACATTTGAA。