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產(chǎn)黃曲霉毒素真菌多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-07-28
  • 技術(shù)成熟度:可以量產(chǎn)
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201510362608.3 
  • 技術(shù)(專利)名稱 產(chǎn)黃曲霉毒素真菌多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法 
  • 項目單位 中糧集團有限公司
  • 發(fā)明人 胡夢龍,傅洋,蔡軍,石嵩,李慧,黃蔚霞 
  • 行業(yè)類別 醫(yī)療器械-外科器械
  • 技術(shù)成熟度 可以量產(chǎn)
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 趙曄婧
  • 發(fā)布時間 2021-07-28  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,提供了一種針對產(chǎn)黃曲霉毒素真菌的多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法。本發(fā)明的多重PCR檢測用引物組、試劑盒及檢測方法通過組合利用真菌通用分子標識序列(內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列ITS)及黃曲霉毒素生化合成過程中三個關(guān)鍵基因(產(chǎn)黃曲霉毒素調(diào)節(jié)基因aflR、柄曲霉素轉(zhuǎn)甲氧基酶基因omt?1及雜色曲霉素A脫氫酶基因ver?1),可實現(xiàn)對產(chǎn)黃曲霉毒素真菌檢測覆蓋范圍廣、特異性強且靈敏度高的技術(shù)效果,并且檢測耗時短、操作較簡單、檢測通量高、設(shè)備要求低,可以節(jié)省大量的人力、物力和財力,適合快速檢測的要求,易于在實際生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種用于檢測產(chǎn)黃曲霉毒素真菌的多重PCR檢測用引物組,其特征在于,所述多重
    PCR檢測用引物組由特異性針對真菌內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列ITS的ITS引物對、特異性針對產(chǎn)
    黃曲霉毒素調(diào)節(jié)基因aflR的aflR引物對、特異性針對柄曲霉素轉(zhuǎn)甲氧基酶基因omt-1的
    omt-1引物對及特異性針對雜色曲霉素A脫氫酶基因ver-1的ver-1引物對組成,其中,
    所述ITS引物對的序列為:
    上游引物ITS-600-F:5’-TCCGTAGGTGAACCTGCG-3’;
    下游引物ITS-600-R:5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’,
    所述aflR引物對的序列為:
    上游引物aflR-421-F:5’-AGCAAAGCACCCTGTCTTC-3’;
    下游引物aflR-421-R:5’-TTGAGAACGATAAGGACGACC-3’,
    所述omt-1引物對的序列為:
    上游引物omt-1-317-F:5’-TCATTTTCGAGGAGGTTGCC-3’;
    下游引物omt-1-317-R:5’-AGCTGTTTCTCGCATTTCAGC-3’,
    所述ver-1引物對的序列為:
    上游引物ver-1-201-F:5’-TTCGGTCACCTGAAAGACG-3’;
    下游引物ver-1-201-R:5’-TGACGCAAGCGGTGTTAG-3’。
    2.一種用于檢測產(chǎn)黃曲霉毒素真菌的多重PCR檢測用試劑盒,所述試劑盒中包含根據(jù)
    權(quán)利要求1所述的多重PCR檢測用引物組。
    3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多重PCR檢測用試劑盒,其進一步包含反應(yīng)緩沖液、4種脫氧核
    苷三磷酸和DNA聚合酶。
    4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多重PCR檢測用試劑盒,其進一步包含具有如下成分的PCR反
    應(yīng)基礎(chǔ)溶液:Tris-HCl;KCl;MgCl2;dATP、dTTP、dGTP及dCTP;以及Taq DNA聚合酶。
    5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多重PCR檢測用試劑盒,其中,各成分以如下濃度包含于50μL
    的PCR最終反應(yīng)溶液中:

    6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多重PCR檢測用試劑盒,其中,各成分以如下濃度包含于50μL
    的PCR最終反應(yīng)溶液中:

    7.根據(jù)權(quán)利要求2-6中任一項所述的多重PCR檢測用試劑盒,其進一步包含陰性對照
    DNA和陽性對照DNA。
    8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多重PCR檢測用試劑盒,其中,所述陰性對照DNA來自黑曲霉菌
    株CGMCC 3.0316,所述陽性對照DNA來自黃曲霉菌株CGMCC 3.4410。
    9.使用根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重PCR檢測用引物組或根據(jù)權(quán)利要求2-8中任一項所述
    的多重PCR檢測用試劑盒對產(chǎn)黃曲霉毒素真菌進行檢測的方法,所述方法包括以下步驟:
    a)提取待檢測樣品的總DNA作為模板DNA的步驟;
    b)使用根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重PCR檢測用引物組或根據(jù)權(quán)利要求2-8中任一項所述
    的多重PCR檢測用試劑盒對所述模板DNA進行多重PCR擴增的步驟;
    c)對擴增產(chǎn)物進行檢測的步驟;
    從而對所述待檢測樣品中產(chǎn)黃曲霉毒素真菌的存在與否進行分析。
    10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中,
    所述多重PCR擴增的反應(yīng)體系為:以總體積為50μL計,加入濃度為10pg/μL~100ng/μL
    的模板DNA 1μL;
    所述多重PCR擴增的反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性2min;94℃變性20s、55℃退火30s、72℃延
    伸40s,共進行35個循環(huán);72℃延伸7min。
    展開

專利技術(shù)附圖

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