1.一種用于檢測產(chǎn)黃曲霉毒素真菌的多重PCR檢測用引物組,其特征在于,所述多重
PCR檢測用引物組由特異性針對真菌內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列ITS的ITS引物對、特異性針對產(chǎn)
黃曲霉毒素調(diào)節(jié)基因aflR的aflR引物對、特異性針對柄曲霉素轉(zhuǎn)甲氧基酶基因omt-1的
omt-1引物對及特異性針對雜色曲霉素A脫氫酶基因ver-1的ver-1引物對組成,其中,
所述ITS引物對的序列為:
上游引物ITS-600-F:5’-TCCGTAGGTGAACCTGCG-3’;
下游引物ITS-600-R:5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’,
所述aflR引物對的序列為:
上游引物aflR-421-F:5’-AGCAAAGCACCCTGTCTTC-3’;
下游引物aflR-421-R:5’-TTGAGAACGATAAGGACGACC-3’,
所述omt-1引物對的序列為:
上游引物omt-1-317-F:5’-TCATTTTCGAGGAGGTTGCC-3’;
下游引物omt-1-317-R:5’-AGCTGTTTCTCGCATTTCAGC-3’,
所述ver-1引物對的序列為:
上游引物ver-1-201-F:5’-TTCGGTCACCTGAAAGACG-3’;
下游引物ver-1-201-R:5’-TGACGCAAGCGGTGTTAG-3’。
2.一種用于檢測產(chǎn)黃曲霉毒素真菌的多重PCR檢測用試劑盒,所述試劑盒中包含根據(jù)
權(quán)利要求1所述的多重PCR檢測用引物組。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多重PCR檢測用試劑盒,其進一步包含反應(yīng)緩沖液、4種脫氧核
苷三磷酸和DNA聚合酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多重PCR檢測用試劑盒,其進一步包含具有如下成分的PCR反
應(yīng)基礎(chǔ)溶液:Tris-HCl;KCl;MgCl
2;dATP、dTTP、dGTP及dCTP;以及Taq DNA聚合酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多重PCR檢測用試劑盒,其中,各成分以如下濃度包含于50μL
的PCR最終反應(yīng)溶液中:
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多重PCR檢測用試劑盒,其中,各成分以如下濃度包含于50μL
的PCR最終反應(yīng)溶液中:
7.根據(jù)權(quán)利要求2-6中任一項所述的多重PCR檢測用試劑盒,其進一步包含陰性對照
DNA和陽性對照DNA。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多重PCR檢測用試劑盒,其中,所述陰性對照DNA來自黑曲霉菌
株CGMCC 3.0316,所述陽性對照DNA來自黃曲霉菌株CGMCC 3.4410。
9.使用根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重PCR檢測用引物組或根據(jù)權(quán)利要求2-8中任一項所述
的多重PCR檢測用試劑盒對產(chǎn)黃曲霉毒素真菌進行檢測的方法,所述方法包括以下步驟:
a)提取待檢測樣品的總DNA作為模板DNA的步驟;
b)使用根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重PCR檢測用引物組或根據(jù)權(quán)利要求2-8中任一項所述
的多重PCR檢測用試劑盒對所述模板DNA進行多重PCR擴增的步驟;
c)對擴增產(chǎn)物進行檢測的步驟;
從而對所述待檢測樣品中產(chǎn)黃曲霉毒素真菌的存在與否進行分析。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中,
所述多重PCR擴增的反應(yīng)體系為:以總體積為50μL計,加入濃度為10pg/μL~100ng/μL
的模板DNA 1μL;
所述多重PCR擴增的反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性2min;94℃變性20s、55℃退火30s、72℃延
伸40s,共進行35個循環(huán);72℃延伸7min。