描述了用于測定生物學樣品中的胸苷激酶(TK)活性的方法和測定試劑盒，所述生物學樣品例如血液、血清、血漿、腦脊液(CSF)、胸膜液、腹水、組織、細胞及其提取物。該方法包括使溶于緩沖液的基本反應混合物與生物學樣品接觸，所述基本反應混合物包括：固體表面附著的引物和/或模板，修飾的脫氧核苷，例如溴脫氧尿苷、碘脫氧尿苷、氟脫氧尿苷或乙烯基脫氧胸苷作為激酶底物，磷酸供體，核苷酸聚合酶，和缺乏TK活性的激酶來源，例如酵母提取物。溫育后，測定已摻入固體表面附著的引物和/或模板的修飾的脫氧核苷的量，并且生物學樣品中存在的TK活性與摻入的修飾的脫氧核苷的量成正比。該方法和測定試劑盒在細胞增殖病癥或疾病例如癌癥的診斷、疾病進展的預后監控和治療作用中，以及在影響酶促途徑的化合物例如新藥候選物的篩選中有用，所述化合物可以阻礙胸苷磷酸的形成或干擾核酸合成。

1.一種用于測定生物學樣品中的胸苷激酶(TK)活性的非診斷
方法，其包括下列步驟：在包含附著至固體表面的單鏈多核苷酸作為
引物或模板的容器中，使溶于緩沖液的基本反應混合物與所述生物學
樣品接觸，所述基本反應混合物包括下列組分：未附著的單鏈多核苷
酸作為模板和/或引物、修飾的脫氧核苷作為激酶底物、磷酸供體、核
苷酸聚合酶和缺乏TK活性的激酶來源，溫育所述混合物，
任選地洗滌所述溫育的混合物以去除未附著的反應組分，
測定已摻入所述固體表面附著的引物或模板的所述修飾的脫氧
核苷的量，和
由所述摻入的修飾的脫氧核苷的量測定所述生物學樣品中存在
的所述TK活性。
2.根據權利要求1的方法，其中洗滌所述溫育的混合物，并且
其中摻入的所述修飾的脫氧核苷的量的測定通過下述進行：向所述溫
育的混合物中加入對所述修飾的脫氧核苷有親和力的標記的親和分
子，并通過借助于所述標記測定附著的所述標記的親和分子的量來測
定已摻入的所述修飾的脫氧核苷的量。
3.根據權利要求1的方法，其中所述激酶來源選自缺乏TK活性
的哺乳動物細胞系提取物、缺乏TK活性的真菌細胞系提取物、缺乏
TK活性的細菌細胞系提取物、來自純化的哺乳動物細胞提取物的胸
苷酸激酶(TMPK)和二磷酸核苷激酶(NdK)的組合、來自純化的
真菌細胞提取物的TMPK和NdK的組合、來自純化的細菌細胞提取
物的TMPK和NdK的組合、重組哺乳動物TMPK和重組哺乳動物NdK
的組合、重組真菌TMPK和重組真菌NdK的組合、和重組細菌TMPK
和重組細菌NdK的組合，以及來自所述提及的來源的任何TMPK和
NdK的組合。
4.根據權利要求3的方法，其中所述激酶來源是酵母細胞提取
物。
5.根據權利要求4的方法，其中所述酵母細胞提取物的所述酵
母是啤酒糖酵母。
6.根據權利要求1-5中任何一項的方法，其中所述修飾的核苷來
源于相應的修飾的脫氧核苷。
7.根據權利要求1-6中任何一項的方法，其中所述修飾的脫氧核
苷選自溴脫氧尿苷、碘脫氧尿苷、氟脫氧尿苷和乙烯基脫氧胸苷。
8.根據權利要求7的方法，其中所述修飾的脫氧核苷是溴脫氧
尿苷。
9.根據權利要求1-8中任何一項的方法，其中所述固體表面是塑
料表面。
10.根據權利要求9的方法，其中所述塑料表面是塑料微量滴定
板。
11.根據權利要求1的方法，其中所述固體表面附著的單鏈多核
苷酸經由其5’末端附著或在活化板中使用咪唑進行固定。
12.根據權利要求1的方法，其中所述生物學樣品選自血液、血
清、血漿、腦脊液(CSF)、胸膜液、腹水、組織、細胞及其提取物。
13.一種用于測定生物學樣品中的胸苷激酶(TK)活性的測定試
劑盒，其在幾個分開的容器中包括
固體表面附著的單鏈多核苷酸作為引物和/或模板，
未附著的單鏈多核苷酸作為模板和/或引物，
修飾的脫氧核苷作為激酶底物，
磷酸供體，
核苷酸聚合酶，
缺乏TK活性的激酶來源，和
緩沖液。
14.根據權利要求13的測定試劑盒，其另外包括用于標準化所
述測定的參考TK。
15.根據權利要求13的測定試劑盒，其另外包括一塊或幾塊微
量滴定板，其在一個或幾個孔中包含表面附著的單鏈多核苷酸。
16.根據權利要求13的測定試劑盒，其另外包括對修飾的脫氧
核苷有親和力的標記的親和分子。
17.根據權利要求16的測定試劑盒，其中所述標記的親和分子
是酶標記的親和-綴合物。
18.根據權利要求17的測定試劑盒，其中所述酶標記的親和綴
合物是用堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標記的抗體。
19.根據權利要求13的測定試劑盒，其中所述缺乏TK活性的激
酶來源選自缺乏TK活性的哺乳動物細胞系提取物、缺乏TK活性的
真菌細胞系提取物、缺乏TK活性的細菌細胞系提取物、來自純化的
哺乳動物細胞提取物的胸苷酸激酶(TMPK)和二磷酸核苷激酶(NdK)
的組合、來自純化的真菌細胞提取物的胸苷酸激酶和NdK的組合、
來自純化的細菌細胞提取物的胸苷酸激酶和NdK的組合、重組哺乳
動物胸苷酸激酶和重組哺乳動物NdK的組合、重組真菌胸苷酸激酶
和重組真菌NdK的組合、以及重組細菌胸苷酸激酶和重組細菌NdK
的組合。
20.根據權利要求19的測定試劑盒，其中所述激酶來源是酵母
細胞提取物。