1.在單個PCR反應容器中五重檢測核酸提取液中靶核酸的實時PCR方法，其是
非診斷方法，所述靶核酸來自埃博拉-扎伊爾型、埃博拉-蘇丹型、埃博拉-本迪布
焦型、埃博拉-塔伊森林型和埃博拉-萊斯頓型，其包括：
(1)在所述單個PCR反應容器中混合核酸提取液、DNA聚合酶、逆轉錄酶、RNA
保護劑、dNTP、靶核酸引物對和靶核酸探針，其中所述探針標記有熒光基團和
淬滅基團，而且各種探針標記的熒光基團的熒光檢測波長互不相同，其中，
靶核酸引物對包括
GCCACTCACGGACAATGACA，
GCATGCGAGGGCTGGTT，
GGCAGCTCTTGGCTCACTTG，
TGAGGAGACGTGCAAATGGA，
ACCTCCGACGCGGTACAC，
TGTGGGTGAACAGGAACATCA，
GACCCGGATGATGGCAGAT，
GGCATTCGCCGTCTCACTA，
GCACCGAGGCCCAGAAC，和
CTTCGTGCACTGGTGAGAGTCT，
靶核酸探針包括：
AAGAAATGAACCCTCCGGC，
CAAGCATGGAGAATAT，
CAAGACAGGCAACCTA，
CAACAATTATGGAGACTATC，和
TACGACCGCCAATCG；
(2)進行PCR反應，并實時檢測不同波長的熒光；和，
(3)根據熒光檢測結果判斷是否有靶核酸存在于核酸提取液中。
2.權利要求1所述的方法，其中熒光基團是FAM、VIC、NED、TexasRed和
CY5。
3.權利要求1所述的方法，其中PCR反應的每個循環的條件為94℃10秒、55℃
15秒以及65℃45秒。
4.權利要求1所述的方法，其中每種靶核酸探針在在所述單個PCR反應容器中
的濃度大于5pmol/ml。
5.權利要求4所述的方法，其中每種靶核酸探針在在所述單個PCR反應容器中
的濃度為6～12pmol/ml。
6.權利要求5所述的方法，其中每種靶核酸探針在在所述單個PCR反應容器中
的濃度為7～10pmol/ml。
7.權利要求6所述的方法，其中每種靶核酸探針在在所述單個PCR反應容器中
的濃度為8pmol/ml。
8.權利要求1所述的方法，其中核酸提取液是對樣品采用磁珠提取法提取的。
9.用于在單個PCR反應容器中五重檢測核酸提取液中靶核酸的實時PCR方法的
檢測試劑盒，其包括DNA聚合酶、逆轉錄酶、RNA保護劑、dNTP、靶核酸引
物對和靶核酸探針，其中所述探針標記有熒光基團和淬滅基團，而且各種探針標
記的熒光基團的熒光檢測波長互不相同，其中，
靶核酸引物對包括
GCCACTCACGGACAATGACA，
GCATGCGAGGGCTGGTT，
GGCAGCTCTTGGCTCACTTG，
TGAGGAGACGTGCAAATGGA，
ACCTCCGACGCGGTACAC，
TGTGGGTGAACAGGAACATCA，
GACCCGGATGATGGCAGAT，
GGCATTCGCCGTCTCACTA，
GCACCGAGGCCCAGAAC，和
CTTCGTGCACTGGTGAGAGTCT，
靶核酸探針包括：
AAGAAATGAACCCTCCGGC，
CAAGCATGGAGAATAT，
CAAGACAGGCAACCTA，
CAACAATTATGGAGACTATC，和
TACGACCGCCAATCG。
10.權利要求9所述的試劑盒，其中熒光基團是FAM、VIC、NED、TexasRed
和CY5。
11.權利要求9所述的試劑盒，其還包括磁珠提取法所需試劑。
12.權利要求9～11之任一所述的試劑盒在制備用于在單個PCR反應容器中五重
檢測核酸提取液中靶核酸的實時PCR方法的檢測試劑產品中的應用。
13.權利要求12所述的應用，其中所述檢測試劑產品是用于權利要求1-8之任一
所述的方法的檢測試劑產品。
14.互不干擾實時PCR的核酸混合物，其是引物或探針的混合物，所述引物或
探針是
GCCACTCACGGACAATGACA，
GCATGCGAGGGCTGGTT，
GGCAGCTCTTGGCTCACTTG，
TGAGGAGACGTGCAAATGGA，
ACCTCCGACGCGGTACAC，
TGTGGGTGAACAGGAACATCA，
GACCCGGATGATGGCAGAT，
GGCATTCGCCGTCTCACTA，
GCACCGAGGCCCAGAAC，
CTTCGTGCACTGGTGAGAGTCT，
AAGAAATGAACCCTCCGGC，
CAAGCATGGAGAATAT，
CAAGACAGGCAACCTA，
CAACAATTATGGAGACTATC，和
TACGACCGCCAATCG。
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