1.一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒,其特征在于,本試劑盒由定量RT-PCR反應液、酶混合液、引物探針混合液、CVA2標準品、CVA5標準品、CVA2強陽性對照品、CVA5強陽性對照品、CVA2弱陽性對照品、CVA5弱陽性對照品、陰性對照品組成,其中定量RT-PCR反應液包含PCR反應緩沖液、氯化鎂和三磷酸脫氧核糖核苷酸混合物,酶混合液含耐熱Taq?DNA聚合酶、RNA酶抑制劑和MMLV逆轉錄酶,引物探針混合液包含CVA2、CVA5兩組特異性引物和相應的CVA2、CVA5兩種熒光標記的特異性探針,陰性對照為高溫高壓滅菌的焦碳酸二乙酯處理水,CVA2、CVA5強陽性對照品和CVA2、CVA5弱陽性對照品為包含CVA2、CVA5的基因序列的陽性質粒樣品;強陽性對照品質粒濃度為106copies/ml,弱陽性對照品質粒濃度為103copies/ml;????CVA2、CVA5兩組特異性引物和CVA2、CVA5兩種熒光標記的特異性探針序列如下:上游引物CVA2-F:?5’-?AGTCGRCCAGTGTCTCAYTCA-3’,下游引物CVA2-R:5’-TACACGCCCRGTCTCAATGG-3’,特異性探針CVA2-P:?5’-FAM-?AACAGCTGCWAACACCCAGGTRAGCC-BHQ1-3’,上游引物CVA5-F:?5’-?AAGCGGCGGAGACAGGAG-3’,下游引物CVA5-R:?5’-?CCATGCCTGTTGACCACACA-3’,特異性探針CVA5-P:?5’-HEX-?CAAAYGCCACCGAYGARAGCATGA-BHQ1-3’。2.根據權利要求1所述的一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒,其特征在于,CVA2、CVA5的特異性探針分別采用FAM、HEX兩種熒光標記。3.根據權利要求1所述的一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒,其特征在于,所述CVA2、CVA5標準品的基因序列如下:CVA2標準品序列為:AATGCTACGATAGACAGGGTGTTGAGTCGGCCAGTGTCTCATTCACCAACAGCTGCTAACACCCAGGTGAGCCAGCACTCCATTGAGACTGGGCGTGTACCTGCACTACAAGCTGCTGAAACG;CVA5標準品序列為:ACAGGGCAGGTACCAGCTCTGCAAGCGGCGGAGACAGGAGCGACCTCAAACGCCACCGATGAAAGCATGATTGAAACCAGGTGTGTGGTCAACAGGCATGGGGTTATGGAAACAAGTGTTGAG。4.根據權利要求1所述的一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒,其特征在于,引物探針混合液保存于棕色管。5.根據權利要求1所述的一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒,其特征在于,所述試劑盒于-20℃儲存,減少反復凍融。
展開