本發明提供一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒，由定量RT-PCR反應液、酶混合液、引物探針混合液、CVA2和CVA5標準品、CVA2和CVA5強陽性對照品、CVA2和CVA5弱陽性對照品、陰性對照品組成。本發明運用一步法實時熒光定量RT-PCR技術，采用CVA2、CVA5高度特異的引物和熒光標記探針，從糞便標本中同時檢測出是否有CVA2、CVA5的存在，比單重熒光定量PCR方法更便捷迅速、節約成本。檢測實時、準確定量，為臨床提供早期診斷，為臨床治療方案的制定提供參考依據；可應用于柯薩奇病毒A2、A5型引起暴發疫情的實驗室應急診斷、快速篩查、臨床診斷及手足口病的流行病學的研究。

1.一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒，其特征在于，本試劑盒由定量RT-PCR反應液、酶混合液、引物探針混合液、CVA2標準品、CVA5標準品、CVA2強陽性對照品、CVA5強陽性對照品、CVA2弱陽性對照品、CVA5弱陽性對照品、陰性對照品組成，其中定量RT-PCR反應液包含PCR反應緩沖液、氯化鎂和三磷酸脫氧核糖核苷酸混合物，酶混合液含耐熱Taq?DNA聚合酶、RNA酶抑制劑和MMLV逆轉錄酶，引物探針混合液包含CVA2、CVA5兩組特異性引物和相應的CVA2、CVA5兩種熒光標記的特異性探針，陰性對照為高溫高壓滅菌的焦碳酸二乙酯處理水，CVA2、CVA5強陽性對照品和CVA2、CVA5弱陽性對照品為包含CVA2、CVA5的基因序列的陽性質粒樣品；強陽性對照品質粒濃度為10⁶copies/ml，弱陽性對照品質粒濃度為10³copies/ml；????CVA2、CVA5兩組特異性引物和CVA2、CVA5兩種熒光標記的特異性探針序列如下：上游引物CVA2-F:?5’-?AGTCGRCCAGTGTCTCAYTCA-3’，下游引物CVA2-R：5’-TACACGCCCRGTCTCAATGG-3’，特異性探針CVA2-P:?5’-FAM-?AACAGCTGCWAACACCCAGGTRAGCC-BHQ1-3’，上游引物CVA5-F:?5’-?AAGCGGCGGAGACAGGAG-3’，下游引物CVA5-R:?5’-?CCATGCCTGTTGACCACACA-3’，特異性探針CVA5-P:?5’-HEX-?CAAAYGCCACCGAYGARAGCATGA-BHQ1-3’。2.根據權利要求1所述的一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒，其特征在于，CVA2、CVA5的特異性探針分別采用FAM、HEX兩種熒光標記。3.根據權利要求1所述的一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒，其特征在于，所述CVA2、CVA5標準品的基因序列如下：CVA2標準品序列為：AATGCTACGATAGACAGGGTGTTGAGTCGGCCAGTGTCTCATTCACCAACAGCTGCTAACACCCAGGTGAGCCAGCACTCCATTGAGACTGGGCGTGTACCTGCACTACAAGCTGCTGAAACG；CVA5標準品序列為：ACAGGGCAGGTACCAGCTCTGCAAGCGGCGGAGACAGGAGCGACCTCAAACGCCACCGATGAAAGCATGATTGAAACCAGGTGTGTGGTCAACAGGCATGGGGTTATGGAAACAAGTGTTGAG。4.根據權利要求1所述的一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒，其特征在于，引物探針混合液保存于棕色管。5.根據權利要求1所述的一種檢測柯薩奇病毒A2、A5型的熒光定量試劑盒，其特征在于，所述試劑盒于-20℃儲存，減少反復凍融。