本發明公開了一種HCV 2a亞型NS5B突變檢測的PCR擴增引物、試劑盒及檢測方法。本發明通過特別設計的PCR擴增引物，包括第一引物對和第二引物對，將較難擴增和測序的長片段的NS5B區分成兩個較小的片段進行獨立擴增，再進行測序分析，可以很容易就發現NS5B區域的突變情況，從而在用藥前或用藥過程中可以及時提供指導和支持。進一步，對于使用第一引物對和第二引物對的第一輪PCR擴增的產物不太理想，如產物片段存在非特異性條帶或濃度不高，再使用第三引物對和第四引物對等對第一輪PCR擴增的產物進行第二輪PCR擴增，再進行鑒定或測序分析，可進一步保證測序結果的可靠性，進而可以提高突變檢測的準確性。

1.一種HCV 2a亞型NS5B突變檢測的PCR擴增引物，其特征在于，包括第一引物對、第二
引物對、第三引物對、第四引物對、第五引物對、第六引物對、第七引物對及第八引物對；所
述第一引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述第二引物對
的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示，所述第三引物對的兩條引物的
序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5所示，所述第四引物對的兩條引物的序列分別如
SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:4所示，所述第五引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:7
和SEQ ID NO:2所示，所述第六引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:
8所示，所述第七引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:5所示，所述第
八引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8所示。
2.一種HCV 2a亞型NS5B突變檢測的試劑盒，其特征在于，含有引物試劑，所述引物試劑
中的引物包括權利要求1所述的PCR擴增引物。
3.如權利要求2所述的HCV 2a亞型NS5B突變檢測的試劑盒，其特征在于，還包括RNA提
取試劑、逆轉錄試劑、PCR擴增試劑及電泳鑒定試劑中的至少一種試劑。
4.如權利要求2或3所述的HCV 2a亞型NS5B突變檢測的試劑盒，其特征在于，還包括含
有HCV 2a亞型的HCV陽性對照試劑。
5.一種HCV 2a亞型NS5B突變檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
對含有HCV 2a亞型RNA的待測樣本進行逆轉錄處理，合成HCV cDNA；
對合成的HCV cDNA使用第一引物對和第二引物對進行第一輪PCR擴增，其中，所述第一
引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述第二引物對的兩條
引物的序列分別如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；
對所述第一輪PCR擴增的產物進行測序分析；
所述HCV 2a亞型NS5B突變檢測方法還包括對第一輪PCR擴增的產物進行鑒定的步驟，
若產物片段的長度滿足預設要求，則進行所述測序分析，否則使用第三引物對和第四引物
對對第一輪PCR擴增的產物進行第二輪PCR擴增，再對第二輪PCR擴增的產物進行所述測序
分析，其中，所述第三引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5所示，所
述第四引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:4所示；
所述HCV 2a亞型NS5B突變檢測方法還包括對第二輪PCR擴增的產物進行鑒定的步驟，
若產物片段的長度滿足預設要求，則進行所述測序分析，否則對合成HCV cDNA使用第五引
物對和第六引物對重新進行第一輪PCR擴增，其中，所述第五引物對的兩條引物的序列分別
如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:2所示，所述第六引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:
3和SEQ ID NO:8所示，并對使用所述第五引物對和所述第六引物對進行第一輪PCR擴增的
產物進行鑒定，若產物片段的長度滿足預設要求，則進行所述測序分析，否則使用第七引物
對和第八引物對對該第一輪PCR擴增的產物進行第二輪PCR擴增，再對擴增的產物進行鑒定
和分析，其中，所述第七引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:5所示，
所述第八引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8所示。