特異性檢測和區(qū)分復合樣品中病原性大腸桿菌的寡核苷酸序列和方法。所述復合樣品可以是食品樣品、水樣品，或者選擇性富集的食品基質(zhì)。本發(fā)明的檢測方法可以使用有或無內(nèi)部陽性對照物的PCR擴增方法及合適的引物對。進行所述方法的試劑可以在試劑盒中或者以片劑形式提供。

1.一種檢測食品樣品或者水樣品中病原性大腸桿菌存在的方
法，所述方法包括：
(a)使用如下的引物對對樣品進行PCR擴增：
(ii)SEQ?ID?NO：5和6，
以產(chǎn)生PCR擴增結(jié)果；以及
(b)檢測步驟(a)的PCR擴增結(jié)果以檢測所述引物對的擴增產(chǎn)物，
其中所述引物對的擴增產(chǎn)物的陽性檢測結(jié)果提示樣品中存在病原性
大腸桿菌。
2.一種用于檢測食品樣品或者水樣品中存在病原性大腸桿菌的
方法，所述方法包括：
(a)使用兩種不同引物對對樣品進行PCR擴增，其中所述兩
種引物對中的一種是(ii)SEQ?ID?NO：5和6，而另一種選自如下一組：
(i)SEQ?ID?NO：2和3，
(iii)SEQ?ID?NO：8和9，以及
(iv)SEQ?ID?NO：10和11，
以產(chǎn)生PCR擴增結(jié)果；以及
(b)檢測步驟(a)的PCR擴增結(jié)果以檢測所述兩種不同引物對的
擴增產(chǎn)物，其中所述兩種不同引物對的擴增產(chǎn)物的陽性檢測結(jié)果提示
樣品中存在病原性大腸桿菌。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述兩種引物對包括(a)(ii)和(a)(iv)。
4.權(quán)利要求2的方法，其中所述兩種引物對包括(a)(ii)和(a)(iii)。
5.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(b)中使用解鏈曲線分析來檢
測擴增產(chǎn)物。
6.權(quán)利要求1的方法，在所述步驟(a)之前進一步包括制備用于
PCR擴增的樣品的步驟。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述制備步驟包括至少一個如下步
驟：(1)細菌富集，(2)從樣品中分離細菌細胞，(3)細胞裂解，(4)總
DNA提取。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品包括選擇性富集的食品基
質(zhì)。
9.一種用于檢測病原性大腸桿菌的分離的多核苷酸，其包括
SEQ?ID?NO：5，或SEQ?ID?NO：6。
10.一種用于檢測病原性大腸桿菌的試劑盒，其包括：
(a)(ii)SEQ?ID?NO：5和6，以及任選存在的選自如下一組的引物
對：
(i)SEQ?ID?NO：2和3，
(iii)SEQ?ID?NO：8和9，以及
(iv)SEQ?ID?NO：10和11；以及
(b)熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。
11.權(quán)利要求10的試劑盒，其中成分(a)包括(a)(ii)和(a)(iv)。
12.權(quán)利要求10的試劑盒，其中成分(a)包括(a)(ii)和(a)(iii)。
13.一種用于進行PCR的復制組合物，其包括：
(a)(ii)SEQ?ID?NO：5和6，以及任選存在的選自如下一組的引物
對：
(i)SEQ?ID?NO：2和3，
(iii)SEQ?ID?NO：8和9，以及
(iv)SEQ?ID?NO：10和11；以及
(b)熱穩(wěn)定DNA聚合酶。
14.權(quán)利要求13的復制組合物，其中成分(a)包括(a)(ii)和(a)(iv)。
15.權(quán)利要求13的復制組合物，其中成分(a)包括(a)(ii)和(a)(iii)。
16.一種包括權(quán)利要求13、14或者15的復制組合物的片劑。
17.一種檢測樣品中病原性大腸桿菌的試劑盒，其包括權(quán)利要求
16的片劑。