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一種自組裝硅質體靜電紡絲纖維膜固定化細胞生產乳酸鏈球菌素的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-19
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710881428.5 
  • 技術(專利)名稱 一種自組裝硅質體靜電紡絲纖維膜固定化細胞生產乳酸鏈球菌素的方法 
  • 項目單位 南通大學
  • 發明人 湯佳鵬,葛彥,傅海洪 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 李錚
  • 發布時間 2022-01-19  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種自組裝硅質體靜電紡絲纖維膜固定化細胞生產乳酸鏈球菌素的方法,包括利用靜電自組裝法將乳酸乳球菌原生質體包裹在有機?無機復合脂質形成的穩定硅質體中;將殼聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯完全溶解于乙酸溶液,加入甘油,再加入硅質體,通過靜電紡絲制得納米纖維膜,將其成卷裝入層析柱中;配制蔗糖、大豆蛋白胨、L?抗環血酸、磷酸氫二鈉和硫酸鎂的混合溶液,經過濾除菌后,以一定流速流經層析柱,經檢測流出液中含有乳酸鏈球菌素。本發明固定化細胞的方法具有高效、抗染菌、產率高、產物濃度高的特點,便于后續產物分離和純化。
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  • 02

    說明書

    1.一種自組裝硅質體靜電紡絲纖維膜固定化細胞生產乳酸鏈球菌素的方法,其特征在于,包括如下步驟:步驟一:制備乳酸乳球菌原生質體硅質體:稱取質量比為0.1~0.2:1~3的有機-無機復合脂質與乳酸乳球菌原生質體;將有機-無機復合脂質溶于三氯甲烷中,蒸發除去三氯甲烷得到類脂質薄膜;乳酸乳球菌原生質體懸浮于甘露醇水溶液中,然后加入到所得類脂質薄膜中,攪拌混勻并迅速加熱到45~50℃,熱激10~30s同時水浴超聲,冷卻至4℃后靜置,經脂質體擠出器擠出,得到乳酸乳球菌原生質體硅質體懸液;步驟二:制備納米纖維膜:取殼聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯溶解于乙酸水溶液中,加入甘油,再加入步驟一制得的乳酸乳球菌原生質體硅質體懸液,攪拌混勻,通過靜電紡絲制得納米纖維膜,將其成卷填入帶保溫夾套的層析柱中;步驟三:配制蔗糖、大豆蛋白胨、L-抗環血酸、磷酸氫二鈉和硫酸鎂的混合水溶液,經過濾除菌后,流經步驟二制備的層析柱,收集流出液,即得;步驟一中,所述乳酸乳球菌原生質體通過如下步驟獲得:步驟a:取乳酸乳球菌菌體用無菌水洗滌,離心取沉淀;步驟b:配制酶解液:分別取步驟a沉淀質量2~4%的溶壁酶、蝸牛酶、纖維素酶和崩潰酶,以質量體積比0.1:5~10g/mL加入到含有0.3~0.5mol/L KCl和0.2~0.4mol/L MgSO4的水溶液中,攪拌溶解,再經過濾除菌,制得酶解液;步驟c:將步驟a得到的沉淀加入到步驟b得到的酶解液中,渦旋混勻,25~30℃下水浴酶解3~8h后,離心取沉淀即得乳酸乳球菌原生質體;步驟一中,所述有機-無機復合脂質的結構式如下: 所述有機-無機復合脂質與三氯甲烷混合的質量體積比為100~200:10mg/mL;所述甘露醇水溶液的濃度為100~180g/L,乳酸乳球菌原生質體與甘露醇水溶液混合的質量體積比為1~3:10g/mL;所述脂質體擠出器采用聚碳酸酯濾膜,濾膜的孔徑為0.5~1.0μm。2.根據權利要求1所述的生產乳酸鏈球菌素的方法,其特征在于,步驟二中,所述殼聚糖的粘均分子量為5.0×105,脫乙酰度為80~85%;所述聚乙烯醇重均分子量為180000~200000;所述聚氧化乙烯重均分子量為1×106~1×107;所述乙酸水溶液體積濃度為1~2%;所述殼聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯的質量比為1~2:2~4:7~9,以總的質量濃度1.5~2%溶解于乙酸水溶液中。3.根據權利要求1所述的生產乳酸鏈球菌素的方法,其特征在于,步驟二中,所述甘油的加入量與乙酸水溶液的質量體積比為1~2g/L;所述乳酸乳球菌原生質體硅質體懸液的加入量與乙酸水溶液的體積比為1:100~500。4.根據權利要求1所述的生產乳酸鏈球菌素的方法,其特征在于,步驟二中,所述靜電紡絲的接收裝置采用鋁箔,噴頭到接收裝置的距離為5~30cm,電壓為3~30KV,噴射流量為1~5mL/h。5.根據權利要求1所述的生產乳酸鏈球菌素的方法,其特征在于,步驟三中,所述混合水溶液中蔗糖濃度為15~30g/L,大豆蛋白胨濃度為15~30g/L,L-抗環血酸濃度為0.2~1.0g/L,磷酸氫二鈉濃度為5~20g/L,硫酸鎂濃度為0.1~0.8g/L。6.根據權利要求1所述的生產乳酸鏈球菌素的方法,其特征在于,步驟三中,所述混合水溶液的流速為0.2~0.5mL/h;層析柱夾套溫度控制在27~32℃。
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