本發明涉及一種殼聚糖水凝膠三維細胞培養基的制備和使用方法，由水溶性殼聚糖、交聯劑反應得到。本發明的殼聚糖水凝膠三維細胞培養基，組分安全性高，生物相容性好，水凝膠強度可根據所需細胞環境調節，可實現可控體外細胞三維增殖。

1.一種可注射殼聚糖水凝膠三維細胞培養基，由水溶性殼聚糖與交聯劑在溶液中發生反應得到水凝膠，用于細胞的三維培養，所述的交聯劑為二4-醛基苯甲酸聚乙二醇酯；殼聚糖溶液的濃度為0.03g/mL，交聯劑的濃度為0.005-0.5g/mL；室溫下成膠反應時間0.5到15min；所述的水溶性殼聚糖包括羧甲基殼聚糖、羧乙基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基殼聚糖、羥丁基殼聚糖、羥戊基殼聚糖中的一種或多種的混合物；殼聚糖的脫乙酰度在85％-99.9％之間，重均分子量在5,000-1,000,000之間；所述的交聯劑的重均分子量在100-10,000之間；其中殼聚糖溶液與交聯劑溶液的體積比為1:1；所述三維細胞培養基，用于體細胞、干細胞及腫瘤細胞的三維培養；所述的溶液為水、生理鹽水、磷酸緩沖溶液、液態細胞培養基。2.根據權利要求1所述的三維細胞培養基，用于制備注射制劑，其特征在于，所述的三維培養基在搭載細胞后經注射器擠出，并自發愈合成完整的水凝膠。