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高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法及誘導培養基

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-28
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201510824482.7 
  • 技術(專利)名稱 高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法及誘導培養基 
  • 項目單位 劉寒冬
  • 發明人 劉寒冬 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 錢朱妍
  • 發布時間 2022-01-28  
  • 01

    項目簡介

    本發明屬于植物愈傷組織誘導及培養技術領域,具體涉及一種高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法及誘導培養基,誘導培養基成分包括MS粉2.2?4.4g/L、2,4?二氯苯氧乙酸1?2mg/L、蔗糖20?30g/L、瓊脂6?8g/L,pH值為5.6?5.8,將哥倫比亞型擬南芥的子葉作為外植體接種于該誘導培養基上,放在溫室中,一定條件下培養,可得到淡黃色、結構松脆的顆粒狀愈傷組織,誘導率為100%,極大的縮減了擬南芥愈傷組織形成時間,提高了誘導率,為以擬南芥愈傷組織為基礎的高效擴繁體系及遺傳轉化體系研究提供重要的技術平臺和支持。
    展開
  • 02

    說明書

    1.高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的培養基,其特征在于,用于將擬南芥子葉誘
    導培養成愈傷組織,所述誘導培養基成分包括MS粉2.2-4.4g/L、2,4-二氯苯氧乙酸1-2mg/
    L、蔗糖20-30g/L、瓊脂6-8g/L,pH值為5.6-5.8。
    2.根據權利要求1所述的高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的培養基,其特征在于,
    所述誘導培養基成分包括MS粉4.4g/L、2,4-二氯苯氧乙酸1.0mg/L、蔗糖20-30g/L、瓊脂6-
    8g/L,pH值為5.6-5.8。
    3.高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法,其特征在于,包括如下步驟:
    1)按照權利要求1或2任一所述的配方配置誘導培養基;
    2)外植體預處理及接種,在超凈工作臺上,用鑷子將生長良好的無菌實生擬南芥用解
    剖刀切下葉片,并將切下的葉片置于步驟1)中配置的誘導培養基中;
    3)愈傷組織的誘導,將步驟2)中接種好擬南芥子葉的誘導培養基置于溫室中,溫室培
    養溫度為24-26℃、濕度為50-70%、光照強度為1500-2000lux、光照時間為16h,培養7-10天
    后獲得淡黃色、顆粒狀的愈傷組織團塊。
    4.按照權利要求3所述的高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法,其特征在于,還
    包括增殖步驟,將培養10-15天后的愈傷組織在超凈工作臺上用鑷子剔除老化部分,挑取部
    分愈傷組織接種到新的所述誘導培養基上,在一個培養基上接種多次并置于溫室中培養,
    培養溫度為24-26℃、濕度為50-70%、光照強度為1500-2000lux、光照時間為16h,培養10-
    15天后,即獲得大量淡黃色、顆粒狀的愈傷組織。
    5.按照權利要求3或4任一所述的高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法,其特征
    在于,所述生長良好的無菌實生擬南芥的培養方法包括如下步驟:
    a)擬南芥種子消毒,在無菌超凈臺上,將哥倫比亞型擬南芥種子置于離心管中,首先用
    體積分數75%的乙醇消毒30-60s后,使用滅菌水清洗一次,再使用體積分數11%的次氯酸
    鈉振蕩消毒10-15min,最后用滅菌水洗3-5次;
    b)生長培養基的配制,以MS培養基為基本培養基,成分包括MS粉2.2-4.4g/L、MES 0.5-
    1g/L、蔗糖20-30g/L、瓊脂6-8g/L,pH值為5.6-5.8;
    c)哥倫比亞型擬南芥的培養,將消毒完成的種子點于所述生長培養基上,置于4℃冰箱
    春化2-3d后移到溫室中,溫室培養溫度為24-26℃、濕度為50-70%、光照強度為1500-
    2000lux、光照時間為16h,9-10d后獲得哥倫比亞型擬南芥無菌實生苗。
    6.按照權利要求3或4任一所述的高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法,其特征
    在于,誘導所選的所述無菌實生擬南芥為已長出兩片完整葉子的擬南芥。
    7.按照權利要求3或4任一所述的高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法,其特征
    在于,用解剖刀切下擬南芥葉片時,切割位置在距兩片葉子結合處0.1cm的葉柄上。
    8.按照權利要求3或4任一所述的高效誘導哥倫比亞型擬南芥愈傷組織的方法,其特征
    在于,將擬南芥葉片接種到所述誘導培養基中時,葉面朝下接種。
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專利技術附圖

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