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一種降解藥渣中殘留泰樂菌素的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-05
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200810093396.3 
  • 技術(專利)名稱 一種降解藥渣中殘留泰樂菌素的方法 
  • 項目單位 寧夏大學
  • 發明人 馬玉龍,張作義,劉寧普,謝麗 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 錢冰煜
  • 發布時間 2021-10-05  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及一種降解藥渣中殘留泰樂菌素的方法,尤其是涉及一種利用微生物降解藥渣中殘留泰樂菌素的方法,主要包括:土壤菌懸液的制備、菌種選育培養基的配制、菌種馴化培養基的配制、菌種篩選培養基的配制、菌種活化復壯培養基的配制、藥渣發酵培養基的配制、降解菌株的篩選等步驟;本發明提供一種通過篩選,培育出能夠降解藥渣中殘留泰樂菌素的復合菌,然后再從復合菌中分離、純化得到降解泰樂菌素的菌株,配制相應的藥渣培養基,接入降解菌發酵降解藥渣中殘留的泰樂菌素。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種降解藥渣中殘留泰樂菌素的方法,其特征在于:該方法包括如下步驟:?1)土壤菌懸液的制備:用四分取樣法,稱取堆放泰樂菌素藥渣附近土樣1~10g,置于三角瓶中,加入100~200ml磷酸鹽緩沖溶液,搖勻后,置于恒溫搖床中,25~35℃下,200r/min振蕩20~40min;?2)菌種選育培養基的配制:將下述重量的原料混合而成即可得菌種選育培養基:泰樂菌素藥渣200g,蛋白胨10g,葡萄糖10g,K2HPO40.1g,FeSO4·7H2O?0.2g,水800ml;?3)菌種馴化培養基的配制:將下述原料按重量比混合而成即可得菌種馴化培養基:①一級馴化培養基:泰樂菌素藥渣與水按1∶9的比例配制;②二級馴化培養基:泰樂菌素藥渣與水按2∶8的比例配制;③三級馴化培養基:泰樂菌素藥渣與水按3∶7的比例配制;④四級馴化培養基:泰樂菌素藥渣與水按4∶6的比例配制;?4)菌種篩選培養基的配制:將下述重量的原料混合而成即可得菌種篩選培養基:①初篩分離培養基:泰樂菌素藥渣200g,瓊脂20g,水800ml;②復篩分離培養基:酵母浸出粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,酒石酸泰樂菌素標準品0.04g,水1000ml;③分離純化培養基:蛋白胨10g,葡萄糖5g,泰樂菌素藥渣浸出液1000ml;?5)菌種活化復壯培養基的配制:將下述重量的原料混合而成即可得菌種活化復壯培養基:酵母浸出粉10g,蛋白胨10g,泰樂菌素藥渣浸出液1000ml;?6)藥渣發酵培養基的配制:將下述重量的原料混合而成即可得藥渣發酵培養基:泰樂菌素藥渣700~900g,麩皮300~100g,K2HPO4?0.1~0.2g,FeSO4·7H2O?0.1~0.2g,水800~900ml;?7)取上述步驟1)制備的土壤菌懸液10~20ml,加入到100~200g上述步驟2)制備的菌種選育培養基中,攪拌均勻,置25~35℃恒溫搖床中,120r/min下培養60~72h;取培養后的菌懸液,按2~5%的接種量接入到上述步驟3)制備的一級菌種馴化培養基中,置25~35℃恒溫搖床中,?120r/min培養60~72h,重復該步驟5~10次,所用菌種馴化培養基由一級逐級升至四級;?8)?取馴化后的培養液1~3ml,用磷酸鹽緩沖溶液梯度稀釋為10-1、10-2......10-10濃度,然后采用傾注平板法將稀釋后菌液接種于初篩分離培養基,混合后傾注倒板,依據菌落形態及其生長周期的不同,依次編號并將其接入液體復篩分離培養基,經培養傳代后再采用涂布平板法接種到固體復篩分離培養基,經再次分離后將其接入液體分離純化培養基,培養傳代后劃線接種到固體分離純化培養基,并重復該步驟3~4次后,完成菌種的分離純化,即可篩選出降解泰樂菌素的菌株;?9)取上述步驟8)降解泰樂菌素的菌株,接入到上述步驟5)制備的菌種活化復壯培養基中,置25~35℃恒溫搖床中,120r/min下培養20~30h,4000r/min離心15min后,懸浮于新的菌種活化復壯培養基中,25~35℃恒溫搖床中120r/min繼續培養8~14h,即可得到泰樂菌素降解菌懸液;?10)取上述步驟6)制備的藥渣發酵培養基100~200g,接入上述步驟9)制備的泰樂菌素降解菌懸液2~10ml,攪拌均勻,25~35℃發酵60~120h,然后在60~100℃下烘干,粉碎后即可。?2.如權利要求1所述的一種降解藥渣中殘留泰樂菌素的方法,其特征在于:所述步驟4)的泰樂菌素藥渣浸出液是按照藥渣濕重與水的比例為1∶2配制,具體步驟如下:?a.取泰樂菌素藥渣100g,加入200ml已滅菌的蒸餾水或去離子水,攪拌均勻后在室溫下浸泡12~20h;?b.將上述步驟a中浸泡液分裝于離心管中,梯度離心30min,棄沉淀;?c.取梯度離心后的上清液,再通過抽濾棄漂浮的雜質即可。?3.如權利要求1所述的一種降解藥渣中殘留泰樂菌素的方法,其特征在于:所述步驟7)泰樂菌素降解菌的馴化過程經歷了兩個階段,其依次為菌株性狀的穩定階段和菌株對泰樂菌素降解能力的穩定階段。?
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