本發(fā)明公開了一種霍山石斛種苗無激素快速培養(yǎng)方法，本方法從霍山采摘生長100天左右尚未完全成熟的霍山石斛果莢，以果莢里乳白色粉末狀的幼胚為外植體。采用優(yōu)化的新型培養(yǎng)基，與經(jīng)典的MS培養(yǎng)基相比，無機(jī)鹽等化學(xué)物、糖的用量少，針對(duì)培養(yǎng)的不同階段在培養(yǎng)基中分別添加山芋泥、麩皮糊、香蕉皮勻漿液等食用或廢棄物，碳源采用市售食用白糖，不添加激素。培養(yǎng)6個(gè)月種苗健壯，每棵苗高3-4厘米、具有3-4個(gè)節(jié)、6-8片葉、4-5條根、根長2-4厘米，移栽成活率達(dá)95%以上。之后轉(zhuǎn)入原產(chǎn)地自然環(huán)境中栽培，可以保持野生石斛品質(zhì)。幼胚繁殖率高，種苗繁殖周期縮短，培養(yǎng)基成本低，提高了山芋、麩皮、香蕉皮（廢棄物）的利用價(jià)值，優(yōu)化的培養(yǎng)基適用于大規(guī)模工廠化生產(chǎn)。

1.一種霍山石斛種苗無激素快速培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）原球莖培養(yǎng)????①選擇外植體????從霍山采摘生長100天左右尚未完全成熟的霍山石斛果莢，先用1%的洗潔精浸泡10-15min，然后用流水刷洗干凈；????②滅菌????將洗凈的果莢放入超凈工作臺(tái)無菌燒杯中，先用75%的酒精浸泡30-60s，無菌水沖洗1次，再用5%的次氯酸鈉溶液浸泡20-30min，無菌水沖洗2-3次；③接種培養(yǎng)嚴(yán)格無菌操作，解剖刀沿果莢縱向切開，乳白色粉末狀的幼胚直接接種在1號(hào)培養(yǎng)基上，所述1號(hào)培養(yǎng)基為：營養(yǎng)元素母液100ml/L+山芋泥100g/L+麩皮糊10g/L+白糖10g/L+瓊脂8g/L，幼胚在培養(yǎng)基的表面分散均勻，密而不成團(tuán)，一個(gè)果莢接種4瓶；培養(yǎng)條件：室內(nèi)溫度24-28℃，第一周暗培養(yǎng)，以后每天自然光照，培養(yǎng)10天，幼胚變成乳黃色開始脹大，培養(yǎng)20天發(fā)育成黃綠色的顆粒狀，培養(yǎng)30天頂端長出很小的綠色的葉原基，培養(yǎng)45天發(fā)育成基部有絲狀物翠綠的原球莖；（2）分化葉培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)的無菌區(qū)，用接種鏟從母瓶取出原球莖接入2號(hào)培養(yǎng)基：營養(yǎng)元素母液100ml/L+山芋泥100g/L+麩皮糊10g/L?+白糖20g/L?+瓊脂8g/L中培養(yǎng)分化芽，不要鏟到培養(yǎng)基，1個(gè)母瓶接種5-6瓶，每瓶接種1鏟，原球莖在培養(yǎng)基的表面分散均勻，彼此間距2mm；培養(yǎng)條件：室內(nèi)溫度24-28℃，自然光照，培養(yǎng)15天長出第一片葉，培養(yǎng)30天長出第二片葉，培養(yǎng)45天長成高1.0-1.5cm健壯翠綠的小苗；（3）繼代培養(yǎng)??用無菌圓頭鑷子輕輕取出小苗接入3號(hào)培養(yǎng)基：營養(yǎng)元素母液100ml/L+山芋泥50g/L+麩皮糊10g/L+香蕉皮勻漿液100g/L+白糖10g/L+瓊脂8g/L，1個(gè)母瓶接種9-10瓶，小芽在培養(yǎng)基的表面分散均勻，彼此間距5mm，培養(yǎng)條件：室內(nèi)溫度24-28℃，自然光照，培養(yǎng)45天左右，長成苗高2-2.5cm、3-4片葉、2個(gè)節(jié)的大苗；（4）分化根培養(yǎng)從母瓶里取出大苗先放在培養(yǎng)皿中，輕輕剔除基部附著的培養(yǎng)基并將大苗分散開，接入4號(hào)培養(yǎng)基：營養(yǎng)元素母液50ml/L+山芋泥50g/L+麩皮糊10g/L+香蕉皮勻漿液80g/L+白糖10g/L+瓊脂8g/L，進(jìn)行生根培養(yǎng)，250?ml三角瓶接種20-22棵，650?ml組培瓶接種25-26棵，每棵間距1?cm，輕按苗基部接觸培養(yǎng)基即可；每個(gè)母瓶接種12-15瓶；培養(yǎng)條件：室內(nèi)溫度24-28℃，自然光照，培養(yǎng)12天就有根萌發(fā)，培養(yǎng)50天左右，生長成健壯的完整植株，生根率為100%，每棵苗高3-3.5cm，6-8片葉，3-5條根，根長2-3cm，根粗壯；（5）煉苗與移栽①煉苗選取苗高3-3.5cm，具有6-8片葉、3-5條根的健壯試管苗，打開封口膜，在溫度20-30℃室內(nèi)自然光下煉苗5-7天；②移栽取出試管苗，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，將根部浸入0.5%KMnO₄溶液中浸泡4-6min，取出等根表面水分晾干；栽培基質(zhì)為：水苔、小石子、栗粉，栽培容器為小塑料杯，水苔用1%KMnO₄溶液浸泡20-30min后用洗衣機(jī)甩干，小石子提前用水浸泡3-5h；1-2棵石斛為一簇將根捋順，用一小縷水苔將其根部包裹，水苔以此為中心纏繞，每纏繞1.5cm包裹進(jìn)1-2棵石斛，莖基部不能包裹，松緊適中，包裹的大小與小塑料杯直徑相當(dāng)，放進(jìn)塑料杯前杯底部先放少許的栗粉，上面用已浸泡好的小石子固定，放入室內(nèi)，保持環(huán)境溫度為20-30℃，自然光照射，第一周不能澆水，每天用噴霧器噴霧2-3次，前兩周保持濕度為60-70%，以后逐漸降低濕度、每周澆水一次、一次性澆透，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)苗的成活率；所述營養(yǎng)元素母液的制備方法如下：稱取10-12g硝酸鉀、8-10g硝酸鈣、1.5-2g磷酸二氫鉀、?2-2.5g硫酸鎂，先分別用少量超純水充分溶解后混合，然后用1000ml容量瓶定容即可。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種霍山石斛種苗無激素快速培養(yǎng)方法，其特征在于，山芋的預(yù)處理如下：將山芋削去皮，稱取400-500g，切成4cm×2cm×1cm的小片，加入1000-1500ml水煮熟，冷卻后用組織勻漿機(jī)在5000-6000r/min速度下勻漿3-5min，加水定容到2000ml即得山芋泥；每克山芋相當(dāng)于4-5毫升的山芋泥。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種霍山石斛種苗無激素快速培養(yǎng)方法，其特征在于，麩皮的預(yù)處理如下：將麩皮先在干燥箱60-70℃下干燥1-2h后，用固體粉碎機(jī)在10000-15000r/min速度下粉碎5-10min，過50-60目不銹鋼面粉篩，稱取100-200g加600-800ml水一起放在不銹鋼鍋中煮，先高溫煮沸再低溫悶20-30min，加水定容到1000ml即得麩皮糊；每克麩皮相當(dāng)于5-10毫升的麩皮糊。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種霍山石斛種苗無激素快速培養(yǎng)方法，其特征在于，香蕉皮的預(yù)處理如下：稱取香蕉皮100-200g加入300-500ml水，用組織勻漿機(jī)在4000-5000r/min速度下勻漿5-8min，將香蕉皮勻漿液用4層紗布過濾，勻漿液收集于1000m1燒杯中，加水至800ml即得香蕉皮勻漿液，每克香蕉皮相當(dāng)于4-8毫升的香蕉皮勻漿液。