本發明涉及一種利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，屬于植物細胞工程和分子生物學技術領域。將酸棗葉片接種于WPM不定芽啟動培養基中暗培養誘導2～4d，得到外植體；將含有植物表達載體的農桿菌菌液侵染外植體，得到被侵染的外植體；將被侵染的外植體置于WPM固體培養基上，暗培養2～4d；將暗培養后的葉片轉入WPM固體篩選培養基中進行暗培養，共暗培養14～16d后移至光下，在含0.1mg/L吲哚乙酸和0.5mg/L赤霉素的WPM培養基中進行葉片再生的伸長培養，得到不定芽，將不定芽轉到MS培養基中進行擴繁，得到遺傳轉化后的酸棗植株。本發明提供的酸棗遺傳轉化體系方法為酸棗提供了合適的再生體系，且轉化頻率高，重復性高，有利于酸棗的遺傳改良。

1.一種利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，包括以下步驟：
1)將酸棗葉片接種于WPM不定芽啟動培養基中暗培養誘導2～4d，得到外植體，所述WPM
不定芽啟動培養基包括0.8～3.0mg/L噻苯隆、0.2～0.5mg/L吲哚丁酸、28～32g/L蔗糖和5
～7g/L瓊脂；
2)將含有植物表達載體的農桿菌菌液侵染所述步驟1)得到的外植體，得到被侵染的外
植體；
3)將所述步驟2)得到的被侵染的外植體置于WPM固體培養基上，暗培養2～4d，所述WPM
固體培養基包括0.5～2.0mg/L噻苯隆和0.25～0.4mg/L吲哚丁酸；
4)將所述步驟3)暗培養后的葉片轉入WPM固體篩選培養基中進行暗培養14～16d，所述
WPM固體篩選培養基含有0.8～2.5mg/L噻苯隆、0.2～0.4mg/L吲哚丁酸、180～220mg/L頭孢
霉素和15～25mg/L卡那霉素；
所述暗培養結束后，轉入WPM伸長培養基中進行葉片再生的伸長培養，得到不定芽，所
述WPM伸長培養基含有0.1mg/L吲哚乙酸和0.5mg/L赤霉素的；
5)將所述步驟4)得到的不定芽擴繁，得到遺傳轉化后的酸棗植株；
所述步驟2)中植物表達載體為pBI121-SPDS。
2.根據權利要求1所述的利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，其特征在于，
所述步驟2)中侵染的時間為10～20min。
3.根據權利要求1所述的利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，其特征在于，
所述步驟4)的不定芽誘導培養過程中，不定芽誘導培養的光周期為12～16h/d，所述不定芽
誘導培養的時間為30～40d，所述WPM固體不定芽誘導培養基包括0.08～0.12mg/L吲哚丁
酸、0.3～0.6mg/L赤霉素、180～220mg/L頭孢霉素和15～25mg/L卡那霉素。
4.根據權利要求1所述的利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，其特征在于，
所述步驟5)的不定芽擴繁具體為：待不定芽的莖長為15～20mm時，將不定芽轉到MS培養基
中擴繁，所述MS培養基包括0.8～1.2mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、0.3～0.6mg/L吲哚丁酸和18～
22mg/L卡那霉素。
5.根據權利要求1所述的利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，其特征在于，
所述步驟1)、3)、4)和5)中的培養溫度獨立地選為25±2℃。
6.根據權利要求1所述的利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，其特征在于，
所述步驟1)前還包括：將酸棗葉片進行前處理；
所述前處理的過程具體為：剪下酸棗組培苗形態學自上而下第3～5枚葉片，將剪下的
葉片作為轉化材料；
將所述轉化材料沿葉片中脈垂直方向橫切2～4個傷口，切斷主脈但不切斷葉片；
所述步驟1)中的接種以近軸端接觸培養基方式進行。
7.根據權利要求1所述的利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，其特征在于，
所述農桿菌菌液的制備方法包括以下步驟：將農桿菌菌株的單菌落接種于YEB液體培養基
中暗培養至OD600為0.5～0.7，所述YEB液體培養基包含40～55mg/L利福平、40～55mg/L頭
孢霉素和40～55mg/L卡那霉素；
以0.02～0.05％的接種量將所述暗培養得到的菌液接種于不含抗生素的YEB液體培養
基中，繼續培養至OD600為0.4～1.0；
將所述OD600為0.4～1.0的菌液與150～300μmol/L的乙酰丁香酮混合，繼續培養0.8～
1.5h，得到農桿菌菌液。
8.根據權利要求1所述的利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，其特征在于，
所述步驟5)后還包括：將所述遺傳轉化后的酸棗植株進行分子檢測；
所述分子檢測包括以下步驟：
利用PCR方法對遺傳轉化后的酸棗植株進行檢測，根據是否有目的基因條帶，確定目的
基因DNA的整合情況。
9.根據權利要求8所述的利用葉片為受體建立酸棗遺傳轉化體系的方法，其特征在于，
所述分子檢測后還包含：將所述檢測后的植株進行小苗生根和移栽；
所述小苗生根和移栽的過程具體為：將所述檢測后的植株繼續培養，待長至株高為1.5
～2cm后，轉入生根培養基中生根；根生長至2～3cm后，移入營養土中繼續生長。