本發明公開了一種16型人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)LE基因在大腸桿菌原核表達菌株的構建及其表達條件的優化方法，以HPV16LE為目的基因，通過分子克隆技術構建得到HPV16L2E7重組表達質粒，并在大腸桿菌中進行表達，從中篩選出具有高表達水平的重組菌株，最后從(1)培養基成分，(2)培養基pH條件，(3)誘導時機，(4)氨芐青霉素濃度，(5)接種量，(6)誘導劑，(7)誘導溫度七個方面對該重組工程菌的表達條件進行了比較。該培養基能充分滿足工程菌在表達蛋白過程中的營養要求，和傳統的表達培養基相比成本下降，并且有效的控制了培養誘導過程中的關鍵參數。

1.一種16型人乳頭瘤病毒L₂E₇基因在大腸桿菌中的優化表達方法，其特
征在于以16型人乳頭瘤病毒L₂E₇為目的基因，通過分子克隆技術構建得到16
型人乳頭瘤病毒L₂E₇-pET32a重組質粒，并在大腸桿菌BL21DE3中進行表達，
從中篩選出重組菌株，最后從(1)培養基成分，(2)培養基pH條件，(3)誘
導時機，(4)氨芐青霉素濃度，(5)接種量，(6)誘導劑，(7)誘導溫度七個
方面對該重組工程菌的表達條件進行了比較；通過優化試驗，得出優化表達條
件：(1)含有初始葡萄糖濃度0.4％-6％，初始胰蛋白胨含量0.5％-1.0％以及初始
酵母提取物含量0.5％-1.0％的表達培養基，(2)培養基初始pH值7.0，(3)誘
導時機為菌液在600nm波長下的光密度為0.2-2.0，(4)氨芐青霉素濃度為50
克/升，(5)接種量為5％，(6)異丙基硫代半乳糖苷濃度為0.1-2毫摩爾，(7)
誘導溫度28-37℃。
2.根據權利要求1所述的優化表達方法，其特征在于優化表達條件為：(1)
含有1％葡萄糖的表達培養基，(2)培養基初始pH值7.0，(3)誘導時機為菌液
在600nm波長下的光密度為1.1，(4)氨芐青霉素濃度為50克/升，(5)接種
量為5％，(6)異丙基硫代半乳糖苷濃度為0.25毫摩爾，(7)誘導溫度37℃，
最終重組蛋白相對表達量為15％，包涵體得率13％。
3.根據權利要求1所述的優化表達方法，其特征在于所用到的表達培養基
配方為：七水磷酸氫二鈉12.8克，磷酸氫鉀3克，氯化鈉0.5克，氯化銨1
克，1摩爾硫酸鎂2毫升，1摩爾氯化鈣0.1毫升，胰蛋白胨2.5-5克，酵
母提取物2.5-5克，葡萄糖5-10克，加水至1000毫升。