1.一種毛竹Phyllostachys edulis胚乳培養的方法,其特征在于:由以下步驟組成:外
植體的制備和消毒,外植體接種及愈傷組織誘導,愈傷組織的分化成苗,以及壯苗、煉苗和
移栽過程,具體步驟如下:
(1)外植體的制備和消毒:對開花毛竹進行人工授粉,于授粉后30-40d取發育飽滿的種
子,放入存有冰袋的保溫箱中冷藏,運至實驗室,用4℃預冷的75%乙醇消毒1min;然后用4
℃預冷的0.2%的次氯酸鈉消毒20-25min,期間不斷振蕩;最后用4℃預冷的無菌水沖洗5-7
遍,用無菌紙吸干表面水分,備用;
(2)外植體接種及愈傷組織誘導:取消毒好的外植體,用鑷子小心地剝去內外稃片,然
后用鑷子輕輕擠壓種胚使胚乳擠出,將胚乳接種到愈傷組織誘導培養基上,于4℃冰箱中過
夜,次日置于26℃暗培養10-20d使胚乳上形成愈傷組織,每20-30d將愈傷組織在相同培養
基上繼代一次;愈傷組織誘導培養基是以MS培養基為基礎,添加1-5mg/L的2,4-D、0.3-
1.0mg/L的ZT、500mg/L的脯氨酸、500mg/L的谷氨酰胺、300mg/L的水解酪蛋白、15g/L的葡萄
糖、20g/L的蔗糖、10g/L的麥芽糖、8g/L的瓊脂粉,滅菌前調整pH=5.8;
(3)愈傷組織的分化:將胚乳愈傷組織接種到分化培養基上,26℃光培養20-30d,光照
時間12h/d,光照強度1000-1500lux,部分愈傷組織分化成苗,形成再生植株;分化培養基是
以MS培養基為基礎,添加0.5-2.0mg/L的ZT、0.5-2.0mg/L的IBA、0.5-2.0mg/L的NAA、30g/L
的麥芽糖、8g/L的瓊脂:
(4)壯苗、煉苗和移栽:將再生的小植株接種到壯苗培養基上培養30-40d,開瓶煉苗5-
10d,取出小苗清洗根部的培養基,再用0.1%的高錳酸鉀溶液清洗根部,然后將小苗栽植到
滅菌的介質中,遮陰散射光培養一個月后,幼苗成活;壯苗培養基是以MS培養基為基礎,添
加1-4mg/L的NAA、0.2-0.5mg/L的TDZ、8g/L的瓊脂、30g/L的蔗糖。
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