1.一種芭蕉半液體離體組培快繁方法,包括以下步驟:
(1)外植體的選擇和滅菌
①將無病蟲害的芭蕉植株吸芽在自來水下沖洗干凈,剝去外層老葉和枯葉后,用質量
分數為72%硫酸鏈霉素溶液浸泡預處理3小時,再將經預處理的吸芽剝離為直徑為2~3cm,
長3~4cm的牙尖;
②將牙尖在自來水下清洗干凈,在無菌條件下,用體積分數為70%酒精浸泡30分鐘,再
用質量分數為0.1%升汞溶液滅菌25分鐘,用無菌水沖洗5~6次,再用無菌濾紙吸去表面水
分;
③再將牙尖分割留下生長點及其周圍有4~5層葉鞘的切塊為外植體;
(2)誘導培養
將步驟(1)③所述外植體接種到半液體誘導培養基上,在溫度為28~30℃,光照強度為
1600~2000lx,光照時間為8h/d,每分鐘搖動30次的恒溫搖床培養箱中,培養50天~60天,
得到瘤狀芽體,所述半液體誘導培養基為:
MS培養液+6-BA 4mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂3g/L,pH 5.6~
5.8;
(3)增殖繼代培養
①將誘導培養獲得的瘤狀芽體分割為0.4cm×0.4cm~0.6cm×0.6cm帶芽體的小塊,接
種到固體增殖繼代培養基中,在培養溫度28~30℃,光照強度1600~2000lx,光照時間8h/d
條件下培養25~30天,得到小苗,所述固體增殖繼代培養基為:
MS培養液+6-BA 3mg/L+NAA 0.15mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂6.0g/L,pH 5.6
~5.8;
②將步驟(3)①培養得到小苗中苗高度小于3cm的小苗切割繼續轉接到步驟(3)①中所
述的固體增殖繼代培養基中,在步驟(3)①中所述的培養條件下培養25~30天得到苗高達
3cm以上的小苗;
(4)生根培養
將步驟(3)①和步驟(3)②培養得到的苗高達3cm以上的小苗接種到生根培養基中,在
溫度23~25℃,光照強度2000~2300lx,光照時間為8h/d的條件下培養15~20天,得生根
苗,所述生根培養基為:
MS培養液+NAA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂6.0g/L,pH 5.6
~5.8。
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