本發明公開了一種青花菜小孢子再生植株的培養方法，包括：取青花菜和油菜的花序，直接或誘導后取花序上的花蕾，滅菌后加入NLN-13誘導培養基，制成懸浮液，過濾所得濾液經離心得到沉淀；依次加入NLN-13誘導培養基和活性炭混合液，得到小孢子懸浮液；經熱激處理后培養，得到子葉期胚狀體；接種至胚狀體分化培養基中直至分化，再生成芽；切取再生芽接種至生根培養基上生根培養，經煉苗和移栽，得到再生植株；取再生植株的嫩葉檢測各再生植株倍性，并從再生植株群體中鑒定出油菜再生苗和青花菜再生苗。該方法將易出胚的油菜與難出胚的青花菜品種混合培養，以易出胚的材料帶動難出胚的材料出胚，提高青花菜的出胚率。

1.一種青花菜小孢子再生植株的培養方法，包括以下步驟：
1）取低出胚率的青花菜品種的花序和高出胚率的油菜品種的花序作為
小孢子培養的供體植株；直接或將花序誘導后取花蕾，得到油菜和青花菜
混合花蕾；所述的誘導的條件為：在3℃～6℃誘導0.1小時～48小時；
2）在滅菌后的油菜和青花菜混合花蕾中加入NLN-13誘導培養基，研
磨成懸浮液，過濾所得濾液經離心、棄上清液得到沉淀，依次加入NLN-13
誘導培養基和活性炭混合液，得到小孢子混合懸浮液；
所述的NLN-13誘導培養基為：由NLN液體培養基1L和蔗糖130g
組成，pH?6.0～6.2；
所述的活性炭混合液的組成為：NLN液體培養基1L、瓊脂糖2g-5g
和1g活性炭；
所述的NLN液體培養基，以1L計，組成為：KNO₃125mg，
Ca(NO₃)₂·4H₂O?500mg，MgSO₄·7H₂O?125mg，KH₂PO₄125mg，H₃BO₃6.2mg，
MnSO₄·H₂O?18.95mg，ZnSO₄·7H₂O?8.6mg，Na₂MoO₄·2H₂O?0.25mg，
CuSO₄·5H₂O?0.025mg，CoCl₂·6H₂O?0.025mg，維生素B10.5mg，維生素B6
0.5mg，生物素0.05mg，葉酸0.5mg，Na₂EDTA?37.3mg，FeSO₄·7H₂O?27.8mg，
肌醇100mg，甘氨酸2mg，煙酸5mg，L-谷氨酰胺800mg，谷胱甘肽30mg，
維生素B55mg，絲氨酸100mg和余量的無菌水；
3）將小孢子懸浮液在黑暗條件下于32℃～33℃恒溫熱激處理1天～3
天，后取出在黑暗條件下于25±2℃培養20天~30天，得到子葉期胚狀體；
4）將子葉期胚狀體接種至胚狀體分化培養基中培養至形成胚狀體；將
胚狀體接種到胚狀體分化培養基中繼續培養，直至分化，再生成芽；所述
的胚狀體分化培養基為：由MS培養基1L、蔗糖20g和瓊脂10g～12g組
成，pH5.8～6.1；
5）切取再生芽接種至生根培養基上培養，將根生長健壯的苗經煉苗和
移栽，得到再生植株，鑒定；所述的生根培養基為：由MS培養基1L、糖
20g～30g和瓊脂6g～7g組成，pH5.6～6.0；所述的糖為蔗糖或白糖。
2.根據權利要求1所述的青花菜小孢子再生植株的培養方法，其特征
在于，步驟1）中，所述的花蕾為花序上花瓣和花藥長度比為0.7～1.2、單
核晚期至雙核早期的花蕾。
3.根據權利要求1所述的青花菜小孢子再生植株的培養方法，其特征
在于，步驟2）中，所述的沉淀重復以下操作1～2次：在沉淀中加入NLN-13
誘導培養基，研磨成懸浮液，過濾所得濾液經離心、棄上清液。
4.根據權利要求1所述的青花菜小孢子再生植株的培養方法，其特征
在于，步驟2）中，所述的小孢子混合懸浮液中小孢子的濃度為0.8×10⁵
個/mL～1.2×10⁵個/mL。
5.根據權利要求1所述的青花菜小孢子再生植株的培養方法，其特征
在于，步驟3）中，在黑暗條件下于25±2℃培養20天～30天的具體步驟
為：在黑暗條件下于25±2℃培養至肉眼可見胚狀體時，再在黑暗條件下于
25±2℃條件下搖動培養。
6.根據權利要求1所述的青花菜小孢子再生植株的培養方法，其特征
在于，步驟4）中，所述的培養條件為：每天12小時～18小時光照和20℃～
28℃下培養。