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一種提高蛹蟲草菌液體發酵蟲草素產量的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-25
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710972495.8 
  • 技術(專利)名稱 一種提高蛹蟲草菌液體發酵蟲草素產量的方法 
  • 項目單位 甘肅省科學院生物研究所
  • 發明人 秦鵬,王龍,路等學,郭瑞,趙玉卉,韓融冰,丁品 
  • 行業類別 中藥材獲取-動物藥材養殖
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 秦鈺丹
  • 發布時間 2021-12-25  
  • 01

    項目簡介

    一種提高蛹蟲草菌發酵液蟲草素產量的方法,步驟為:將菌株轉接于無菌PDA斜面培養基上進行培養、活化,得斜面母種;斜面母種轉接至平皿培養基培養,得平板母種;平板母種接種至種子培養基,搖床培養,得種子液;種子液接種至優化培養基并用無菌聚丙烯袋封住三角瓶口,搖床培養,得待補料發酵液;依據腺嘌呤補料公式配制腺嘌呤補料溶液,向待補料發酵液添加100mL腺嘌呤補料溶液,使得發酵液腺嘌呤達到其優化質量濃度,得已補料發酵液;將已補料發酵液于搖床培養后,繼續靜置培養,得含菌絲體的發酵液;將含菌絲體的發酵液中的菌絲體濾除,得蟲草素發酵濾液。其工藝簡單、無污染、蟲草菌發酵液蟲草素產量高達956.020μg/mL。
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  • 02

    說明書

    1.一種提高蛹蟲草菌發酵液蟲草素產量的方法,其特征在于:用中國微生物菌種保藏中心的蛹蟲草菌(Cordyceps militaris)CGMCC3.4655;按照下述步驟進行:(1)將菌株轉接于無菌PDA斜面培養基上進行培養、活化,制得斜面母種;(2)將斜面母種轉接至平皿培養基培養,制得平板母種;(3)將平板母種接種至種子培養基,搖床培養,制得種子液;(4)將種子液接種至優化培養基并用無菌聚丙烯袋封住三角瓶口,于黑暗、25℃、160r/min搖床培養,制得待補料發酵液;優化培養基中腺嘌呤和甘氨酸的質量濃度分別為2g/L和14g/L并且均為優化質量濃度;向待補料發酵液添加腺嘌呤補料溶液的時間點為搖床培養第12d;(5)依據腺嘌呤補料公式配制腺嘌呤補料溶液,向待補料發酵液添加100mL腺嘌呤補料溶液,使得發酵液腺嘌呤達到其優化質量濃度,制得已補料發酵液;其中,腺嘌呤補料公式為ρ=(Vcc+V00)/(Vc+ V0),該腺嘌呤補料公式中,ρ為腺嘌呤的優化質量濃度2 g/L,ρ0為腺嘌呤補料溶液質量濃度,V0為每個待補料發酵液中添加腺嘌呤補料溶液的體積100mL,ρc和Vc分別為第12d待補料發酵液腺嘌呤剩余量和發酵液體積;(6)將已補料發酵液于黑暗、25℃、160 r/min條件下搖床培養6d后,繼續在黑暗、25℃條件下靜置培養6d,靜置培養結束后制得含菌絲體的發酵液;(7)將含菌絲體的發酵液中的菌絲體濾除,收集濾液,制得蟲草素發酵濾液。2.如權利要求1所述的一種提高蛹蟲草菌發酵液蟲草素產量的方法,其特征在于:步驟(2)所述的平皿培養基,其組方為:由蛋白胨10g、牛肉粉3g、氯化鈉5g與瓊脂15g組成的營養瓊脂33g與純凈水1000mL混勻, pH7.3±0.1;方法為:從斜面母種取3mm大小菌塊,接種至平皿培養基,于黑暗、20℃培養9d,制得平板母種。3.如權利要求1所述的一種提高蛹蟲草菌發酵液蟲草素產量的方法,其特征在于:步驟(3)所述的種子培養基,其組方為:葡萄糖30g、蛋白胨8g、酵母粉8g、KH2PO4 1g與水1000mL混勻,pH自然;方法為:無菌條件下用打孔器取平板母種同一半徑上3 mm大小的6個菌塊接種至種子培養基裝載量為300mL/500mL的三角瓶中,于25℃、黑暗、120 r/min 搖床培養3d制成種子液。4.如權利要求1、2或3所述的一種提高蛹蟲草菌發酵液蟲草素產量的方法,其特征在于:步驟(4)所述的優化培養基,其組方為:葡萄糖35 g、蛋白胨17 g、腺嘌呤2 g、甘氨酸14g、KH2PO4 1 g、MgSO4·7H2O 1 g與純凈水1000mL混勻, pH自然;方法為:無菌條件下將10mL的種子液接種至裝有200mL無菌優化培養基、體積為500mL的三角瓶中,用無菌聚丙烯袋封住三角瓶瓶口。5.如權利要求4所述的一種提高蛹蟲草菌發酵液蟲草素產量的方法,其特征在于:步驟(5)所述的已補料發酵液制作中,腺嘌呤補料參數為:腺嘌呤補料溶液的質量濃度按照腺嘌呤補料公式計算,每個待補料發酵液添加腺嘌呤補料溶液的體積為100mL;方法為:將步驟(4)裝有待補料發酵液的三角瓶從搖床取出并置于超凈工作臺,無菌條件下,取下三角瓶瓶口的聚丙烯袋和瓶塞后,將裝載量100mL/150mL的無菌腺嘌呤溶液倒入待補料發酵液,制成已補料發酵液。6.如權利要求1所述的一種提高蛹蟲草菌發酵液蟲草素產量的方法,其特征在于:所述步驟(7)的蟲草素發酵濾液制作方法為:含菌絲體的發酵液經0.22μm濾膜濾除菌絲體,收集濾液,即得蟲草素發酵濾液。
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專利技術附圖

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