本發(fā)明公開了一種花葉枸骨的組織培養(yǎng)方法，包括消毒滅菌、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽。以花葉枸骨當(dāng)年生嫩枝條為外植體，經(jīng)過無菌接種于誘芽培養(yǎng)基上，形成叢生芽后，利用叢生芽再進(jìn)行繼代培養(yǎng)，然后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo)形成生根苗，生根苗經(jīng)過煉苗馴化得到再生植株。本發(fā)明的方法使花葉枸骨的繁殖更為容易，打破了季節(jié)與氣候的限制，縮短繁殖周期。

1.一種花葉枸骨的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟：步驟1：消毒滅菌，選取當(dāng)年生枝條嫩芽，自來水沖洗后，在超凈工作臺上以75％酒精浸泡30秒鐘，再轉(zhuǎn)入0.1％升汞溶液中滅菌8～10分鐘，倒去滅菌液，用預(yù)先準(zhǔn)備好的無菌水沖洗4～5遍，瀝干水后，切取嫩芽組織，接種到誘芽培養(yǎng)基上；步驟2：接種培養(yǎng)a、初代培養(yǎng)，切取花葉枸骨嫩芽接種在WPM+ZT?2.0mg/L+NAA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5～7g/L，pH值5.5～5.8，培養(yǎng)基經(jīng)1.1kg/cm²高壓消毒15～20分鐘，在溫度25～30℃，光照強(qiáng)度1500～2000lux，每日光照12小時(shí)的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)；接種后一周，腋芽開始萌動，當(dāng)30～40天伸長至2±0.2㎝時(shí)，切下進(jìn)入下一階段的繼代培養(yǎng)；b、繼代培養(yǎng)，當(dāng)初代培養(yǎng)的花葉枸骨腋芽長到2±0.2㎝時(shí)，切下接種在WPM+ZT?1.0mg/L+NAA?0.2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5～7g/L，pH值5.5～5.8，在溫度25～30℃，光照強(qiáng)度1500～2000lux，每日光照12小時(shí)，無根的試管苗經(jīng)30～40天培養(yǎng)，叢生苗達(dá)到3±0.2㎝時(shí)，切割以擴(kuò)大繁殖；c、生根培養(yǎng)，當(dāng)花葉枸骨無根苗長至2～3㎝時(shí)，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)；在溫度25～28℃，光照強(qiáng)度1500lux，每日光照10～12小時(shí)，經(jīng)30～40天培養(yǎng)后，見白色短根形成，當(dāng)根長至2～3㎝時(shí)，進(jìn)行煉苗及移栽；所述煉苗及移栽的具體方法為：移栽前，花葉枸骨組培苗煉苗先在溫度20～30℃之間的溫室內(nèi)擰松瓶蓋放置3～5天，然后進(jìn)行溫床過渡移栽；過渡苗床建在普通單體的塑料大棚內(nèi)，床寬1.2m左右，床四周砌高30㎝，床底整平，再用0.15％高錳酸鉀噴灑苗床表面及四周，24小時(shí)后移栽小苗；移栽時(shí)，將幼苗從瓶內(nèi)取出，用清水將根部瓊脂清洗干凈；種入苗床后，選擇清潔水澆灌，移栽當(dāng)天噴施0.3％的磷酸二氫鉀溶液，并噴施800～1000倍的甲基托布津或1000倍多菌靈藥液，以后每隔一周噴施一次，連續(xù)3～4次；步驟2中所述生根培養(yǎng)基的配方為：1/3WPM+0.2～0.3mg/L的NAA+0.3％活性炭。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述花葉枸骨的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：煉苗及移栽過程中，移栽初期要特別注意保持苗床和空氣濕度，需全封閉管理一周，再半封閉管理二周；第25天時(shí)逐步通風(fēng)，并除去覆蓋物；在春秋季節(jié)移栽時(shí)，需遮蔭四周；冬季移栽時(shí)，遮蔭三周。