1.一種用于生豬輔助防疫的復合微生態制劑,其特征在于:其制備方法
的具體步驟如下:
(1)原菌種斜面培養:將冷凍保藏管中的嗜酸乳桿菌、醋酸桿菌、沼澤
紅假單胞菌、釀酒酵母分別在斜面中活化,之后分別置于90mm培養皿中進
行純化,得嗜酸乳桿菌斜面菌種、醋酸桿菌斜面菌種、沼澤紅假單胞菌斜面
菌種、及釀酒酵母斜面菌種,備用;
(2)原菌種液體培養:將嗜酸乳桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養
基Ⅰ中,之后置于37℃下厭氧培養1-2天得嗜酸乳桿菌原菌液;將醋酸桿菌
斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅱ中,接著于30℃下好氧培養1-2天得
醋酸桿菌原菌液;將沼澤紅假單胞菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅲ
中,接著于28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養5-7天得沼澤紅假單胞菌原菌液;
將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅳ中,之后于28℃-30℃下好
氧培養3天得釀酒酵母原菌液;
(3)一級種子培養:將嗜酸乳桿菌原菌液、醋酸桿菌原菌液、沼澤紅假
單胞菌原菌液、及釀酒酵母原菌液按1:1:1:1的菌量比接種于已滅菌的發
酵培養基Ⅰ中進行培養,具體地:先接種醋酸桿菌原菌液與釀酒酵母原菌液,
并于30℃下好氧培養3天,再接種嗜酸乳桿菌原菌液與沼澤紅假單胞菌原菌
液,于30℃下厭氧培養3天,得復合微生態制劑的一級種子;
(4)二級種子培養:將所得的一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的
發酵培養基Ⅱ中,并于30℃下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天,得復合
微生態制劑的二級種子;
(5)成品培養:將所得的二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發酵
培養基Ⅲ中,并于30℃下先好氧3-5天再厭氧培養3-5天,獲得復合微生態
制劑的成品;
其中,所述液體培養基Ⅰ的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉
5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二
鉀2克、硫酸鎂0.2克、硫酸錳0.05克、碳酸鈣20克、瓊脂15克、水1000ml、
pH6.8;所述液體培養基Ⅱ的組分:酵母粉10克、葡萄糖10、磷酸氫二鉀0.5
克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、pH5.5;所述液體培養基Ⅲ的組分:酵母粉
10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、pH?7.0-7.2;所述液體培
養基Ⅳ的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、pH自然;所述發酵
培養基Ⅰ的組分:桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.1%、氯化
鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%,
余量水;所述發酵培養基Ⅱ的組分:桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、
氯化銨0.1%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、
硫酸亞鐵0.025%,余量為水;所述發酵培養基Ⅲ的組分:桔水5%、氯化銨
0.2%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫
酸亞鐵0.025%,余量為水。
2.根據權利要求1所述的一種用于生豬輔助防疫的復合微生態制劑,其
特征在于:所述步驟(1)中嗜酸乳桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種
環將嗜酸乳桿菌接種于已滅菌的斜面培養基Ⅰ上,之后于37℃下厭氧培養1-2
天;所述斜面培養基Ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為20min;且該斜面培
養基Ⅰ的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙
酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.2克、
硫酸錳0.05克、碳酸鈣20克、瓊脂15克、水1000ml、pH6.8。
3.根據權利要求1所述的一種用于生豬輔助防疫的復合微生態制劑,其
特征在于:所述步驟(1)中醋酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:制備斜面
培養基Ⅱ,并將斜面培養基Ⅱ置于121℃下滅菌20min,接著冷卻至60℃以
下加入無水乙醇,且每1000ml斜面培養基Ⅱ需加入100ml無水乙醇,之后用
接種環將醋酸桿菌接種于斜面培養基Ⅱ上,然后于30℃下好氧培養1-2天;
所述斜面培養基Ⅱ的組分:酵母粉10克、葡萄糖10克、磷酸氫二鉀0.5克、
硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、pH5.5。
4.根據權利要求1所述的一種用于生豬輔助防疫的復合微生態制劑,其
特征在于:所述步驟(1)中沼澤紅假單胞菌在斜面中活化的具體操作為:用
接種環將沼澤紅假單胞菌接種于已滅菌的斜面培養基Ⅲ上,之后于28℃-30
℃厭氧鎢絲燈光照培養5-7天;所述斜面培養基Ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌
時間為15min;且該斜面培養基Ⅲ的組分:酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、
硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、pH?7.0-7.2。
5.根據權利要求1所述的一種用于生豬輔助防疫的復合微生態制劑,其
特征在于:所述步驟(1)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環
將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養基Ⅳ上,之后于28-30℃下好氧培養3
天;所述斜面培養基Ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為30min;且該斜面培
養基Ⅳ的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、pH
自然。
展開