本發(fā)明涉及一種通過花藥培養(yǎng)獲得馬蹄蓮(Zantedeschia aethiopica)單倍體植株的方法，屬花卉育種技術領域。本方法步驟為：取蕾期馬蹄蓮幼小花蕾、消毒；取花藥置于愈傷組織誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)、誘導小孢子形成愈傷組織；將愈傷組織置于芽誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導愈傷組織形成芽；將芽置于生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導芽生根，獲得馬蹄蓮單倍體植株。應用該方法對馬蹄蓮花藥進行離體培養(yǎng)，其：平均2.4％的花藥長出愈傷組織，平均每個愈傷組織能分化出6.8個芽，平均每芽生根11條，單倍體植株的比率為69.6％。本方法獲得的馬蹄蓮單倍體植株經(jīng)染色體加倍，只需要一個世代就獲得遺傳上穩(wěn)定的純系，通過產(chǎn)生單倍體植株而獲得純系是有效加速育種材料的純化與育種進程的一條途徑。

1.一種通過花藥培養(yǎng)獲得馬蹄蓮單倍體植株的方法，包括外植體消毒、愈傷組織的誘導、愈傷組織分化芽及芽生根步驟；其特征在于本發(fā)明方法的具體步驟如下：a.供體馬蹄蓮材料的適宜生長季節(jié)為秋、冬季節(jié)，適宜生長溫度為最高氣溫25℃，最低氣溫10℃；b.進行離體培養(yǎng)的花藥及小孢子的合適發(fā)育時期：花蕾微露出葉柄、花藥顏色呈乳白色、小孢子處在單核靠邊期；c.外植體消毒：取小孢子處在單核靠邊期的馬蹄蓮花蕾，剝?nèi)グ诔瑑艄ぷ髋_中，用1％次氯酸鈉+0.05％Tween-20消毒花蕊，時間為10分鐘，然后用無菌水沖洗3次，沖洗時間分別為1分鐘，5分鐘，10分鐘；d.愈傷組織的誘導：用解剖刀將經(jīng)上述消毒的花藥從花蕊上刮下，接種在愈傷組織誘導培養(yǎng)基上，愈傷組織誘導培養(yǎng)基配方為Gamborg?B5+蔗糖80g/L+KT?1.0mg/L+2，4-D?0.5mg/L+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基用母液配置，用1mol/LNaOH調(diào)pH到5.8，121℃15分鐘高壓滅菌，其中激素是過濾滅菌，在培養(yǎng)基分裝前加入，高壓滅菌后的培養(yǎng)基冷卻到40℃時在超凈工作臺內(nèi)快速分裝在已高壓滅菌的60x15mm的培養(yǎng)皿中，每皿裝10mL愈傷組織誘導培養(yǎng)基，接種密度為60-70個花藥/培養(yǎng)皿，培養(yǎng)條件為32℃、暗培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)入25℃、暗培養(yǎng)50天，再將其轉(zhuǎn)至上述愈傷組織誘導培養(yǎng)基，在25℃、黑暗條件下，進行繼代培養(yǎng)20天，花藥長出愈傷組織；e.愈傷組織分化芽：將上述繼代培養(yǎng)20天后的愈傷組織置于芽誘導培養(yǎng)基，誘導生芽，芽誘導培養(yǎng)基配方為Murashige?and?Skoog+蔗糖30g/L+BA?1.0mg/L+NAA0.1mg/L+瓊脂7g/L，pH5.8，培養(yǎng)條件：溫度25℃，光強2000Lx，光照時間16小時，培養(yǎng)30天后愈傷組織分化出芽；f.芽生根：芽長到高4cm時，將芽置于生根培養(yǎng)基誘導生根，生根培養(yǎng)基配方為MS+蔗糖30g/L+IBA?0.5mg/L+瓊脂7g/L，pH到5.8，在溫度25℃，光強2000Lx，光照時間16小時的培養(yǎng)條件培養(yǎng)20天，小苗生根，形成馬蹄蓮單倍體植株。