1.一種微生態制劑制備工藝,包括以下步驟:1)一級種子培養:一級液體種子培養基:蛋白胨16g/L,酵母粉10g/L,NaCl?5g/L,pH?6.0~7.0,121℃滅菌20min;培養條件:將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌分別接種于固體LB培養基平板,37℃培養24h,挑取單菌落接種于10ml液體種子培養基,于旋轉式搖床200rpm,37℃培養14~18h,得到一級種子液;2)二級種子培養:二級液體種子培養基:蛋白胨16g/L,酵母粉10g/L,NaCl?5g/L,pH?6.0~7.0,121℃滅菌20min;培養條件:于1L三角瓶中裝入200ml二級液體種子培養基,分別接種1%~2%上述一級種子液,37℃,200rpm培養,發酵10~18h,得到二級種子液;3)高密度液體發酵:補料液:葡萄糖500g/L,蛋白胨200g/L;液體培養基:蛋白胨16g/L,酵母粉10?g/L,NaCl?5?g/L,pH?6.0~7.0,121℃滅菌20min;培養條件:于5~50L發酵罐中裝入50%體積的液體培養基,分別接種培養基體積1~2%的上述二級種子液,37℃,攪拌200rpm培養6~8h后,開始流加補料液,流速50ml/min,發酵至17~24h,停止發酵,分別得到枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的高密度菌體發酵液;4)固相載體處理:將麩皮和葡萄籽提取物按照質量比98.8:1.2的比例混合后,制成固相載體,采用微波干燥殺菌,功率10kW時間30min,水分含量≤5%;5)液固混配:將步驟3)中所得的菌體發酵液按照重量比1%與步驟4)中處理后的固相載體分別混合,充分拌勻,得到固體菌劑;6)快速固體發酵:將步驟5)中所得固體菌劑在35~37℃條件下靜置1~3h,使菌種成熟并產生芽孢,得到固體發酵產物;7)粉碎:將步驟6)中得到的上述固體發酵產物粉碎,過40~60目篩,經過分袋包裝得到成品微生態制劑。
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