1.一種對產ESBLs大腸桿菌產生耐藥抑制的中藥鑒定方法,其特征在于,
包括以下步驟:
(1)將耐藥產ESBLs的大腸桿菌菌株進行分離,鑒定,并保存備用;
(2)在第一批96孔板上,采用微量試管二倍稀釋法,分別測定西藥和擬
篩選中藥對步驟(1)得到的耐藥產ESBLs的大腸桿菌菌株的最小抑菌濃度,從
而得出西藥的最小抑菌濃度和擬篩選中藥的亞抑菌濃度;
(3)根據步驟(2)所得的擬篩選中藥的亞抑菌濃度,在培養基中加入亞
抑菌濃度的擬篩選中藥后,將該培養基加入第二批96孔板中,在第二批96孔
板上再次采用微量試管二倍稀釋法,測定西藥對耐藥產ESBLs的大腸桿菌菌株
的最小抑菌濃度;
(4)根據步驟(2)所得的擬篩選中藥的亞抑菌濃度,在培養基中加入亞
抑菌濃度的擬篩選中藥后,將該培養基加入第三批96孔板中;按照步驟(3)
中的第二批96孔板上所有長菌的孔所對應的西藥濃度,在第三批96孔板中加
入同樣濃度的西藥,再采用連續傳代法,將第二批96孔板上所有長菌的孔上的
菌傳至加有同樣濃度西藥的第三批96孔板中進行傳代,培養16h后觀測西藥的
最小抑菌濃度;
(5)按照步驟(4)所述的連續傳代法,將第三批96孔板上所有長菌的孔
上的菌傳至加有同樣亞抑菌濃度擬篩選中藥和同樣濃度西藥的第四批96孔板中
進行傳代,培養16h后觀測西藥的最小抑菌濃度;依此傳代,直至觀測到的西
藥最小抑菌濃度與步驟(3)所得的西藥最小抑菌濃度相比變小4倍以上,即判
斷擬篩選中藥對耐藥產ESBLs的大腸桿菌菌株具有耐藥抑制作用,即擬篩選中
藥和西藥體外作用于耐藥產ESBLs的大腸桿菌菌株具有較好的抑制作用;
所述的西藥為對產ESBLs的大腸桿菌耐受的西藥;
所述的傳代的傳代數不超過10代。
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