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一種可常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢真菌及其誘變育種方法和發酵工藝

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-30
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200810198936.4 
  • 技術(專利)名稱 一種可常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢真菌及其誘變育種方法和發酵工藝 
  • 項目單位 李剛
  • 發明人 李剛 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 朱江梅
  • 發布時間 2022-01-30  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種可常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢真菌,該真菌分類學命名為:蝙蝠蛾被毛孢(Hirsutella hepiali Chen et Shen)BS-1,其由以下方法誘變而得:從天然冬蟲夏草〔Cordyceps sinensis(Berk)Sacc.〕子座分離出的蝙蝠蛾被毛孢菌株中提取原生質體,對原生質體在15~60W紫外燈下距離10~50cm,照射1~300s,然后接種于MYG再生培養基上放置在25~28℃恒溫箱中培養;取誘變培養得到的菌株接種于發酵培養基中,在25~28℃下進行10代以上的馴化后,分別測定有效成分含量,選擇生長旺盛、菌粉得率高、有效成分含量高的菌株,最后得到能夠在常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢菌株。本發明還公開了該真菌的誘變育種方法和發酵工藝。所述的蝙蝠蛾被毛孢菌株可在常溫下快速生長,而且其發酵周期短,生產成本低,使產品更具市場競爭力。
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  • 02

    說明書

    1.一種可常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢真菌的誘變育種方法,其特征是:從天然冬蟲夏草〔Cordyceps?sinensis(Berk)Sacc.〕子座分離出的蝙蝠蛾被毛孢菌株(Hirsutellahepiali?Chen?et?Shen)中提取原生質體,對原生質體在15~60W紫外燈下距離10~50cm,照射1~300s,然后接種于MYG再生培養基上放置在25~28℃恒溫箱中培養;取誘變培養得到的菌株接種于發酵培養基中,在25~28℃下進行10代以上的馴化后獲得能夠在常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢菌株;所述的馴化蝙蝠蛾被毛孢誘變株的液體發酵培養基的配方為每1000重量份水中含以下重量份成分:葡萄糖1~3份,黃豆餅粉2~4份,玉米粉2~3份,KH2PO40.1~0.5份,MgSO4.7H2O?0.05-0.20份,pH值5.5~6.5;所述的原生質體的濃度應為105~108個/ml;所述的提取原生質體的具體步驟為:取蝙蝠蛾被毛孢菌株,接種于MYG液體培養基中,18~20℃培養15~20天,然后離心,去上清液,并用滲透壓穩定劑洗滌;取提取原生質體用的復合酶,以滲透壓穩定劑溶解,經微孔濾膜過濾除菌后加入到菌株中在28~35℃酶解3~4小時,將酶解液過濾,離心,去上清液,用滲透壓穩定劑洗滌,得純化的原生質體。2.根據權利要求1所述的可常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢真菌的誘變育種方法,其特征是:所述的MYG液體培養基配方為每100重量份水中含以下重量份成分:麥芽糖8~12份,葡萄糖2~6份,酵母粉3~5份,pH自然;所述的MYG再生培養基配方為甘露醇中含以下質量體積比的成分:麥芽糖8~12%,葡萄糖2~6%,酵母粉3~5%,pH自然;所述的甘露醇的濃度為0.6~0.8mol/L。3.根據權利要求1所述的可常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢真菌的誘變育種方法,其特征是:所述的復合酶液的加入量按每300~500mg濕菌絲加1ml酶液計算;所述的滲透壓穩定劑為0.6~0.8mol/L甘露醇。4.根據權利要求1或3所述的可常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢真菌的誘變育種方法,其特征是:所述的復合酶組成為:質量百分比分別為2~4%的溶壁酶和0.2~0.8%的崩潰酶按1∶1的比例混合而成。5.一種權利要求1制得的可常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢真菌的發酵工藝,其特征是,包括以下步驟:(1)一級搖瓶菌種的培養:將蝙蝠蛾被毛孢菌種接種于裝有一級種子培養基的三角瓶中,放入25℃~28℃恒溫搖床,以150~200rpm培養48~72小時,待菌絲長滿三角瓶后即可;(2)二級搖瓶菌種的培養:將長好的一級搖瓶培養所得的種子接種到裝有二級種子培養基的三角瓶中,并置于25℃~28℃恒溫搖床,以180~200rpm培養48~72小時;待菌絲長滿三角瓶后即可;(3)一級種子罐生產:將一級種子罐培養基裝入攪拌式發酵罐中,滅菌冷卻后,調節pH值到5.5~6.5,將二級搖瓶種子接入一級種子罐中,保持培養溫度為25~28℃,攪拌速度為150~220rpm,通氣量為1∶0.4V/V·min~1∶1.0V/V·min,罐壓0.03~0.06MPa,經24~60h培養,菌種完成對數生長期即可;(4)二級種子罐生產:將二級種子罐培養基裝入攪拌式發酵罐中,滅菌冷卻后,調節pH值到5.5~6.5,將一級種子罐培養好的液體種子全部接入二級種子罐中;保持培養溫度為25~28℃,攪拌速度為150~220rpm,通氣量為1∶0.4V/V·min~1∶1.0V/V·min,罐壓0.03~0.06MPa,經24~60h培養,菌種完成對數生長期即可;(5)發酵罐生產:將液體培養基裝入發酵罐,滅菌冷卻后,調節pH值到5.5~6.5,將二級種子罐培養好的液體種子全部接入發酵罐培養;保持培養溫度為25~28℃,攪拌速度為150~220rpm,通氣量為1∶0.4V/V·min~1∶1.0V/V·min,罐壓0.03~0.06MPa,經60~96h培養,當發酵液變得粘稠,培養基菌pH降到3.4~4.2,發酵液中出現大量小菌球并且菌絲體的濃度達到15~22g濕菌絲/100mL,顯微鏡檢發現菌絲開始衰老、斷裂和自溶的時候,結束發酵放罐。6.根據權利要求5所述的可常溫發酵的蝙蝠蛾被毛孢真菌的發酵工藝,其特征是:所述一級搖瓶種子培養基和二級搖瓶種子培養基配方均為每1000重量份水中含以下重量份成分:葡萄糖1~4份,黃豆餅粉0.5~3份,玉米粉1~3份,麩皮0.1~1.0份,KH2PO40.05~0.2份,MgSO4.7H2O?0.01~0.1份,VB15~50mg/L,pH值5.5~6.5;所述的一級種子罐培養基、二級種子罐培養基和發酵罐培養基配方均為每1000重量份水中含以下重量份成分:葡萄糖1~4份,黃豆餅粉1~4份,蠶蛹粉0.5~2.0份,玉米粉1~4份,麩皮0.1~2份,KH2PO40.1~1.0份,MgSO4.7H2O?0.01~0.1份,VB15~50mg/L,pH值5.5~6.5。
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專利技術附圖

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