本發明涉及高密度液體發酵乳酸鏈球菌的制備方法，并提供了后期處理工藝。本發明提供的乳酸鏈球菌發酵工藝采用菌種的活化、種子培養和發酵培養等步驟進行液體發酵培養。發酵工藝中使用的發酵培養基主要成分為豆粕粉、玉米粉、酵母膏和番茄汁等，原料廉價易得。利用該發酵培養基進行發酵培養時，乳酸鏈球菌生長穩定，發酵液活菌數≥140億/mL，大大高于預期值。本發明進一步對乳酸鏈球菌發酵液進行了后期包埋固定處理，該工藝簡便易行，通過包埋及凍干處理，得到高產量、高活性的乳酸鏈球菌菌劑。本發明有效解決了傳統乳酸鏈球菌發酵成本高、規模小和難長久保存等問題，實現了中試發酵水平上，低成本制備乳酸鏈球菌菌劑產品的目標。

1.乳酸鏈球菌的發酵工藝，其特征在于，將乳酸鏈球菌
(Streptococcus?lactis)在改良MRS固體培養基上進行傳代培養，然后
將活化后的乳酸鏈球菌接種到液體種子培養基中進行靜止培養，所
得種子液按2～5％的接種量接種到發酵培養基中，經過擴大培養得到
乳酸鏈球菌發酵液；
其中，所述改良MRS固體培養基的配方為：葡萄糖10～20g/L、
蛋白胨10～15g/L、酵母膏5～7.5g/L、牛肉膏10～15g/L、磷酸二氫鉀
0.2g/L、乙酸鈉2g/L、檸檬酸三胺2g/L、結晶硫酸鎂0.5g/L、瓊脂
18g/L、水1000mL，pH值6.2～6.9；所述傳代培養是指將乳酸鏈球菌
菌株接種到改良MRS固體斜面培養基上，于30～35℃培養3～5天；
所述液體種子培養基的配方為：豆粕粉15～25g/L、玉米粉
10～20g/L、蔗糖5～10g/L、蛋白胨5～10g/L、酵母膏3～5g/L、牛肉
膏3～5g/L、磷酸二氫鉀0.2～2g/L、乙酸鈉2～5g/L、檸檬酸三胺2
g/L、結晶硫酸鎂0.5g/L、水1000mL，pH值6.2～6.9；靜止培養的條
件為：30～35℃，每隔6h搖瓶一次，靜止培養18～24h；
所述發酵培養基的配方為：豆粕粉15～25g/L、玉米粉10～20
g/L、蔗糖5～10g/L、蛋白胨5～10g/L、酵母膏3～5g/L、番茄汁50
mL/L、磷酸二氫鉀2g/L、結晶硫酸鎂0.5g/L，pH值6.2～6.9；發酵培
養條件為：30～35℃，溶解氧0％，間歇式旋轉環境中培養20～45
h；
所述擴大培養是指進行三級發酵：將種子液按2～5％的接種量接
種到100L發酵罐中進行發酵培養，發酵完成后，將該罐發酵液全部
轉接入1000L發酵罐中，繼續發酵培養，完成后，將1000L罐中發酵
液全部轉接入10000L發酵罐中進行發酵培養，得到發酵產物；其中，
各發酵罐的裝液量為60～70％；
所述發酵培養基中添加的番茄汁，其制備方法為：番茄清洗后置
于90～95℃水中5～10min，然后將番茄剝皮后榨汁，調pH值6.2～6.9，
100～110℃高壓蒸汽滅菌10～15min，即得；
所述乳酸鏈球菌為ACCC?10295。
2.乳酸鏈球菌菌劑的制備方法，將根據權利要求1所述發酵工
藝制備的乳酸鏈球菌發酵液與保護劑混合，然后將所述混合物用海
藻酸鈉溶液進行包埋處理，冷凍干燥后，即得乳酸鏈球菌菌劑；
其中，所述保護劑為純度在99％以上的大豆粉。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，將乳酸鏈球
菌發酵液與滅菌后的大豆粉按1:3～6的重量比混合。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述包埋處
理具體為：將所述混合物與3～5％的海藻酸鈉溶液按1:3～5的重量比
混合。
5.根據權利要求2-4任一項所述方法制備的乳酸鏈球菌菌劑。