1.一種利用雪鐵芋復葉軸高效生產原球莖的方法,其特征在于,包括雪鐵
芋預培養、配制培養基、接種、原球莖培養過程,具體操作步驟如下:
步驟一:雪鐵芋預培養
將栽植在花盆中的雪鐵芋放置在用高錳酸鉀和甲醛熏蒸消毒過的房間中,
將植株用黑塑料袋套上,促使其莖葉徒長,30天后,剪取徒長的雪鐵芋復葉備
用;
步驟二:配制培養基
將玉米棒用粉碎機粉碎成5毫米~10毫米顆粒,在高壓蒸汽滅菌鍋中121℃
高溫消毒15分鐘~20分鐘,取容積為200毫升的組培瓶,每瓶加入消毒后的玉
米棒顆粒15毫米~20毫米高;
將粗莖鱗毛蕨Dryopteris?crassirhizoma?Nakai用組織破碎機打成汁液
后靜置10分鐘~20分鐘,取上清液備用;
每1000毫升蒸餾水中,添加粗莖鱗毛蕨上清液100毫升~200毫升,5克~
6克瓊脂,10克~20克蔗糖,放在容器中攪拌均勻并煮沸后,灌裝在200毫升
的組培瓶中,每瓶裝培養液30毫升~50毫升,讓培養液面高于玉米棒顆粒,
然后將裝有培養基的組培瓶放在蒸汽滅菌鍋中121℃高溫消毒15分鐘~17
分鐘,拿出放在無菌室冷卻后備用;
步驟三:接種
在無菌操作室,將雪鐵芋復葉軸用濃度為75%的酒精浸泡10秒~30秒,再
用0.1%升汞浸泡10分鐘~15分鐘,然后用無菌蒸餾水沖洗3~5遍,用組織破
碎機將消毒后的復葉軸打成汁液,接種至組培瓶中,每瓶滴入雪鐵芋復葉軸汁
液3~5滴,每滴1~2ml;
步驟四:原球莖培養
將接種后的培養瓶放在無菌培養室中,每天200~500Lx光照培養10小時~
15小時,無光照培養9~14小時;每天溫度15℃~20℃,培養10小時~12小
時,23℃~27℃培養12小時~14小時;培養10天~20天后有明顯的愈傷組織
生成,待愈傷組織生長為接種滴液的2~3倍時,將每天培養光照調整為500~
1200Lx,10小時~15小時,無光照培養9小時~14小時;每天20℃~22℃培
養12小時~14小時,25℃培養10小時~12小時;繼續培養4周后,每塊愈傷
組織會分化出2~6個原球莖。
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