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發酵制備含硫氨基酸的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-10
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201280005934.3 
  • 技術(專利)名稱 發酵制備含硫氨基酸的方法 
  • 項目單位 贏創德固賽有限公司
  • 發明人 F·施耐德,S·莫爾克,B·巴特 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 周墨
  • 發布時間 2021-10-10  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及發酵制備選自L-甲硫氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸、L-高半胱氨酸和L-高胱氨酸的含硫氨基酸的方法,包括步驟:a)提供與特定起始菌株相比具有增加的硫代硫酸硫轉移酶活性的腸桿菌科(Enterobacteriaceae)或棒桿菌科(Corynebacteriaceae)微生物;b)在含有無機硫源的培養基中發酵來自a)的微生物,獲得發酵液,所述無機硫源來自硫代硫酸鹽或者硫代硫酸鹽和硫酸鹽的混合物;和c)濃縮來自b)的發酵液中的含硫氨基酸。
    展開
  • 02

    說明書

    1.發酵制備選自L-甲硫氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸、L-高半胱氨酸
    和L-高胱氨酸的含硫氨基酸的方法,包括步驟:
    a)提供過表達編碼具有硫代硫酸硫轉移酶活性的多肽的基因的腸桿菌
    科微生物或棒桿菌科微生物,所述多肽由SEQIDNO:2所示氨基酸序列組
    成;
    b)在含有無機硫源的培養基中發酵來自a)的微生物,獲得發酵液,所
    述無機硫源來自硫代硫酸鹽或者硫代硫酸鹽和硫酸鹽的混合物;和
    c)濃縮來自b)的發酵液中的含硫氨基酸。
    2.根據權利要求1的方法,其中通過選自下組的一或多種措施增加編
    碼具有硫代硫酸硫轉移酶活性的多肽的基因的表達:
    a)所述基因的表達在啟動子的控制下,所述啟動子在用于所述方法的
    微生物中導致與起始菌株相比增加的表達;
    b)與起始菌株相比增加編碼具有硫代硫酸硫轉移酶活性的多肽的基因
    的拷貝數,通過將所述基因以多個拷貝插入質粒中或者通過將所述基因以
    多個拷貝整合進微生物染色體中而進行;
    c)通過使用核糖體結合位點實現所述基因的表達,所述核糖體結合位
    點導致與起始菌株相比在用于所述方法的微生物中的翻譯增加;
    d)通過針對用于所述方法的微生物優化密碼子使用而增加所述基因的
    表達;
    e)通過降低由所述基因轉錄的mRNA中的mRNA二級結構而增加所
    述基因的表達;
    f)通過消除由所述基因轉錄的mRNA中的RNA聚合酶終止子而增加
    所述基因的表達;
    g)通過使用由所述基因轉錄的mRNA中的mRNA穩定化序列而實現
    所述基因的表達。
    3.根據權利要求1的方法,其中所述硫代硫酸鹽是選自堿金屬鹽、堿
    土金屬鹽、銨鹽及其混合物的鹽。
    4.根據權利要求1的方法,其中所述硫酸鹽是選自堿金屬鹽、堿土金
    屬鹽、銨鹽及其混合物的鹽。
    5.根據權利要求1的方法,其中在發酵期間將硫代硫酸鹽的含量基于
    在培養基中和發酵液中無機硫的總含量保持在至少5mol%。
    6.根據權利要求1的方法,其中所述含硫氨基酸是L-甲硫氨酸。
    7.根據權利要求1的方法,其中所述微生物是埃希氏菌屬。
    8.根據權利要求7的方法,其中所述微生物物種是大腸桿菌(Escherichia
    coli)。
    9.根據權利要求1的方法,其中所述微生物是棒桿菌屬。
    10.根據權利要求9的方法,其中所述微生物物種是谷氨酸棒桿菌
    (Corynebacteriumglutamicum)。
    11.根據權利要求10的方法,其中所述微生物選自與起始菌株相比具
    有增加的天冬氨酸激酶活性和/或表達且調節蛋白McbR被弱化或缺失的谷
    氨酸棒桿菌。
    12.根據權利要求8的方法,其中所述微生物選自與起始菌株相比具
    有增加的天冬氨酸激酶活性和/或表達且調節蛋白MetJ被弱化或缺失的大
    腸桿菌。
    13.微生物,選自
    -與起始菌株相比具有增加的天冬氨酸激酶活性和/或表達且調節蛋白
    McbR被弱化或缺失的谷氨酸棒桿菌;
    -與起始菌株相比具有增加的天冬氨酸激酶活性和/或表達且調節蛋白
    MetJ被弱化或缺失的大腸桿菌;
    其中所述微生物分泌或產生L-甲硫氨酸,其中所述微生物過表達編碼
    具有硫代硫酸硫轉移酶活性的多肽的基因,所述多肽由SEQIDNO:2所示
    氨基酸序列組成。
    14.根據權利要求13的微生物,其中所述起始菌株衍生自選自如下組
    的微生物,所述的組由大腸桿菌MG1655、大腸桿菌W3110、大腸桿菌
    DH5α、大腸桿菌DH10B、大腸桿菌BW2952、大腸桿菌REL606、谷氨酸
    棒桿菌ATCC13032、谷氨酸棒桿菌R、谷氨酸棒桿菌DSM20411(先前名稱
    黃色短桿菌(Brevibacteriumflavum))、谷氨酸棒桿菌DSM20412(先前名稱乳
    發酵短桿菌(Brevibacteriumlactofermentum))、谷氨酸棒桿菌DSM1412(先前
    名稱乳發酵短桿菌)、CorynebacteriumefficiensYS-314T(DSM44549)、谷氨
    酸棒桿菌ATCC21608、谷氨酸棒桿菌DSM17322組成。
    展開

專利技術附圖

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