本發(fā)明公開了一種柑橘脫毒及微芽嫁接的快速繁殖方法。本發(fā)明從外植體的誘導(dǎo)、砧木的無菌播種到獲得嫁接苗整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程，創(chuàng)新性的利用誘導(dǎo)出的柑橘不定芽作為接穗，在砧木的無菌苗上進(jìn)行嫁接，從而獲得嫁接苗，經(jīng)移栽后，其成活率高達(dá)93％以上，從而能夠獲得大量的無毒柑橘嫁接苗，使柑橘產(chǎn)業(yè)能夠可持續(xù)健康發(fā)展。本發(fā)明方法操作簡單，易于實(shí)施，所用的培養(yǎng)基和試劑易配置，成本低，易大范圍推廣。

1.一種柑橘脫毒及微芽嫁接的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：S1、柑橘不定芽的誘導(dǎo)：選取柑橘的幼嫩枝條作為外植體，將外植體進(jìn)行消毒處理后接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為26～28℃，光照強(qiáng)度為50～80μmol m^-2s^-1，光照時(shí)間8～10h/d，直至誘導(dǎo)出不定芽；所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基中含有6-芐氨基嘌呤2.0～3.0mg和/或6-糠基氨基嘌呤0.1mg，吲哚-3-丁酸0.1～0.2mg，其余成份為MT培養(yǎng)基，pH為5.9；S2、繼代增殖：將誘導(dǎo)出的不定芽轉(zhuǎn)到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為26～28℃，光照強(qiáng)度為60μmol m^-2s^-1，光照時(shí)間9h/d，繼代增殖得到的不定芽能用于柑橘的微芽嫁接或者繼續(xù)繼代增殖；增殖培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基中含有6-芐氨基嘌呤3.0mg和吲哚-3-丁酸0.1mg，其余成份為MT培養(yǎng)基，pH為5.9；S3、砧木的無菌播種：將砧木種子進(jìn)行消毒處理后，接入萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為26～28℃，光照強(qiáng)度為50～60μmol m^-2s^-1，光照時(shí)間9h/d，獲得砧木無菌苗；萌發(fā)培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基中含有吲哚-3-丁酸1.0～3.0mg和α-萘乙酸0.1mg，其余成份為MT培養(yǎng)基，pH為5.9；S4、柑橘的微芽嫁接：以步驟S2誘導(dǎo)出的不定芽作為接穗，在砧木無菌苗上進(jìn)行嫁接后轉(zhuǎn)入穩(wěn)定培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為26～28℃，光照強(qiáng)度為50～80μmol m^-2s^-1，光照時(shí)間8～10h/d，獲得試管苗；穩(wěn)定培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基中含有α-萘乙酸0.1～0.2mg，吲哚-3-丁酸2.0～3.0mg和赤霉素0.1～0.2mg，其余成份為MT培養(yǎng)基，pH為5.9；S5、試管苗移栽：將試管苗移植到栽培基質(zhì)中，置于濕潤、遮蔭的環(huán)境下培養(yǎng)，澆水，施肥以滿足試管苗生長所需的水分和營養(yǎng)需要，經(jīng)常規(guī)培養(yǎng)，獲得栽培苗；所述的栽培基質(zhì)為泥炭土、椰糠、珍珠巖和河沙按體積比為3:2:2:1混合的混合基質(zhì)；或者為珍珠巖；或者為椰糠、珍珠巖和河沙按體積比為2:2:1混合的混合基質(zhì)；或者為泥炭土和珍珠巖按體積比為1:3混合的混合基質(zhì)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柑橘脫毒及微芽嫁接的快速繁殖方法，其特征在于，所述的選取柑橘的幼嫩枝條作為外植體，將外植體進(jìn)行消毒處理后接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)具體為：選取柑橘的幼嫩枝條作為外植體，將枝條下段含腋芽部分用自來水清洗干凈后，先以體積分?jǐn)?shù)為75％酒精水溶液表面擦洗消毒10s，無菌水洗滌2次，之后在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％升汞水溶液中浸泡8min，并以無菌水洗滌3次，最后將莖段切成1cm大小，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柑橘脫毒及微芽嫁接的快速繁殖方法，其特征在于，所述的選取柑橘的幼嫩枝條作為外植體，將外植體進(jìn)行消毒處理后接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)具體為：選取柑橘的幼嫩枝條作為外植體，將枝條下段含腋芽部分用自來水清洗干凈后，先以體積分?jǐn)?shù)為75％酒精水溶液表面擦洗消毒10s，無菌水洗滌2次，之后在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％升汞水溶液中浸泡8min，并以無菌水洗滌3次，然后將其置于冰箱48h后再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％升汞水溶液浸泡2min，無菌水沖洗3次，最后將莖段切成1cm大小，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柑橘脫毒及微芽嫁接的快速繁殖方法，其特征在于，所述的將砧木種子進(jìn)行消毒處理是將砧木種子用自來水清洗干凈后，先以體積分?jǐn)?shù)為75％酒精水溶液表面擦洗消毒10s，無菌水洗滌2次，之后在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％升汞水溶液中浸泡8min，并以無菌水洗滌3次。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柑橘脫毒及微芽嫁接的快速繁殖方法，其特征在于，所述的以步驟S2誘導(dǎo)出的不定芽作為接穗，在砧木無菌苗上進(jìn)行嫁接后轉(zhuǎn)入穩(wěn)定培養(yǎng)基中培養(yǎng)具體為：以步驟S2誘導(dǎo)出的不定芽作為接穗，在培養(yǎng)得到的砧木無菌苗的三分之一處切除頂端部分，然后在莖段縱切，切面保持光潔，在帶有葉原基的接穗上切取0.7mm微芽植入砧木切口處，使微芽與砧木切口緊密結(jié)合，然后轉(zhuǎn)入穩(wěn)定培養(yǎng)基中培養(yǎng)。