1.一種重組解脂亞羅酵母CCFM-JU277-9菌株全細胞催化劑的制備方法，其特征在于所
述制備方法的步驟如下：
A、確定菌體收集時間
重組解脂亞羅酵母菌株CCFM-JU277-9保藏于在北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國
科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏號為CGMCC
No.7284；在溫度-80℃下保存的重組解脂亞羅酵母CCFM-JU277-9菌株在YNBD平板培養基中
在溫度28℃下活化培養4～5天，再在YNBD液體種子培養基中在溫度28℃與轉速200rpm的條
件下搖床種子培養48h；得到的種子培養液接種于分別含有0.0～10.0g/L油酸的YPD液體培
養基中進行培養，其中，添加的油酸代替YPD液體培養基中對應濃度的葡萄糖，使各組培養
基中的碳元素含量保持一致，同時在不同的培養時間取樣，樣品經洗滌、干燥，稱量并由下
式計算得到菌體干重：
菌體干重(g/L)＝凍干菌體重量(g)/培養體系體積(L)；
以培養時間為橫坐標，以菌體干重為縱坐標繪制生長曲線，由所述生長曲線確定收集
菌體時間為36h；
B、確定培養基中油酸濃度
將在含有0.0～10.0g/L油酸的YPD液體培養基中培養36h的重組解脂亞羅酵母CCFM-
JU277-9菌株培養液，在溫度4℃與8000r/min的條件下離心10min，并用滅菌生理鹽水洗滌2
次，收集酵母菌體，重懸于磷酸鹽緩沖液中，使其濕菌體終濃度為100g/L，再添加底物c9,
c12-LA，在轉速200rpm、溫度28℃與pH6.8的條件下進行催化反應24h，根據t10,c12-LA產量
確定在培養基中的油酸濃度為5.0g/L；
C、確定培養細胞時間
重組解脂亞羅酵母CCFM-JU277-9菌株在含有5g/L油酸的YPD培養基中進行培養，收集
培養時間為32、36和40h的菌體，轉移至20ml磷酸鹽緩沖液中，再添加底物c9,c12-LA，在溫
度28℃下進行全細胞催化反應24h，將t10,c12-CLA產量最高的培養時間確定為培養細胞時
間；
D、透性化處理
在根據步驟A-C確定的條件下，重組解脂亞羅酵母CCFM-JU277-9菌株在含有5g/L油酸
的YPD培養基中進行培養36h，收集培養時間為36h的菌體，重組解脂亞羅酵母CCFM-JU277-9
菌株全細胞轉移至20ml磷酸鹽緩沖液中，將全細胞濕重調節至100g/L，再加入以體積計
0.5％～3.0％吐溫80，在搖床中在溫度28℃與200rpm的條件下處理2h，于是得到能夠提高
t10,c12-CLA產量的重組解脂亞羅酵母CCFM-JU277-9全細胞催化劑。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟B與D中，所述的磷酸鹽緩沖液是
濃度為50mM、pH6.8的由磷酸氫二鈉與磷酸二氫鉀組成的緩沖液。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟D中，重組解脂亞羅酵母CCFM-
JU277-9菌株全細胞轉移至20ml磷酸鹽緩沖液中，將全細胞濕重調節至100g/L，接著采用液
氮速凍30s，然后在溫度28℃的水浴中解凍4.5～5.5min，重復凍融1～5次，于是得到能夠提
高t10,c12-CLA產量的重組解脂亞羅酵母CCFM-JU277-9全細胞催化劑。
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