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高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-08-01
  • 技術(shù)成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN200510013577.7 
  • 技術(shù)(專利)名稱 高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法 
  • 項目單位 天津農(nóng)學(xué)院
  • 發(fā)明人 楊靜慧,劉艷軍,羅云波,張偉玉,楊恩芹 
  • 行業(yè)類別 其他領(lǐng)域
  • 技術(shù)成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 韓水
  • 發(fā)布時間 2021-08-01  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域或植物基因工程領(lǐng)域的一種高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法。主要技術(shù)特點是該方法采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)基因工程技術(shù),采用克隆和反義構(gòu)建乙烯受體蛋白基因并轉(zhuǎn)化番茄,通過馬鈴薯傷流液預(yù)處理、生長素預(yù)處理、轉(zhuǎn)化芽的篩選、伸長培養(yǎng)基等步驟,使番茄的抗衰老基因-反義乙烯基因的轉(zhuǎn)化率大大提高,以此得到抗衰老、耐儲藏的番茄;而且,整個轉(zhuǎn)化工藝比較簡單,成本較低,花費時間較少。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法,其特征在于:該轉(zhuǎn)化方法的步驟為:(1).將番茄種子消毒后播種在MS培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),至兩片子葉長大;(2).取攜帶番茄反義乙烯基因的農(nóng)桿菌單菌落接種到Y(jié)EB液體培養(yǎng)基上,在搖床上培養(yǎng),待其OD值為0.6時待用;(3).馬鈴薯傷流液與農(nóng)桿菌對番茄子葉外植體進行侵染,在抗性培養(yǎng)基上誘導(dǎo)再生芽;(4).采用1-5mg/L的IAA或1-5mg/L的IBA,分別與農(nóng)桿菌對番茄子葉外植體進行侵染,在抗性培養(yǎng)基上誘導(dǎo)再生芽;(5).在含有選擇標(biāo)記的分化培養(yǎng)基上篩選轉(zhuǎn)化芽;(6).將該轉(zhuǎn)化芽在伸長培養(yǎng)基內(nèi)進行長大培養(yǎng);(7).植入生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng);(8).生根移栽;入土栽培。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法,其特征在于:番茄種子接種到MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)的時間為1-3周,培養(yǎng)的環(huán)境條件是:溫度為25-28℃,光照每天12小時,光強2500-5000LUX。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法,其特征在于:在搖床培養(yǎng)攜帶番茄反義乙烯基因的農(nóng)桿菌的方法是:取攜帶番茄反義乙烯基因的農(nóng)桿菌單菌落接種到Y(jié)EB液體培養(yǎng)基上,在25-28℃溫度條件下,在搖床上以200轉(zhuǎn)/分搖擺48小時,該液體培養(yǎng)基內(nèi)添加50mg/L的卡那霉素和100mg/L的慶大霉素,待其OD值為0.6時待用。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法,其特征在于:所述的馬鈴薯傷流液與農(nóng)桿菌對番茄子葉外植體進行侵染的方法是:取馬鈴薯傷流液經(jīng)抽濾滅菌后稀釋1-3倍,與培養(yǎng)過夜的農(nóng)桿菌一起侵染番茄子葉外植體,浸泡10分鐘,然后放在抗性培養(yǎng)基上誘導(dǎo)再生芽。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法,其特征在于:所述的采用IAA或IBA分別與農(nóng)桿菌對番茄子葉外植體進行侵染的方法是:用1-5mg/L的IAA或1-5mg/L的IBA,分別與農(nóng)桿菌一起侵染番茄子葉外植體,浸泡10分鐘,然后放在抗性培養(yǎng)基上誘導(dǎo)再生芽。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法,其特征在于:將經(jīng)過侵染處理后的外植體從菌液中取出,用無菌濾紙吸干,將子葉接種到分化培養(yǎng)基上進行共培養(yǎng),48小時后轉(zhuǎn)入生芽培養(yǎng)基;該分化培養(yǎng)基為由2-6mg/L的BA和0.1-0.4mg/L的IAA構(gòu)成的MS培養(yǎng)基;在該分化培養(yǎng)基上放一層濾紙,把該子葉放置在濾紙上,25-28℃溫度下的密閉和暗條件下培養(yǎng)48小時取出,然后去掉濾紙,在分化培養(yǎng)基上再添加卡那霉素50-100mg/l和500mg/L的羧變青霉素;在此過程中,子葉的傷口要充分接觸培養(yǎng)基,在25-28℃溫度條件下,光強2500-5000LUX的條件下,晝夜光照,培養(yǎng)2-4周后,產(chǎn)生再生轉(zhuǎn)化芽。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法,其特征在于:所述的該轉(zhuǎn)化芽在伸長培養(yǎng)基內(nèi)進行長大培養(yǎng)的方法是:將該轉(zhuǎn)化芽切下,在伸長培養(yǎng)基內(nèi)進行長大培養(yǎng),在25-28℃溫度條件下,光強2500-5000LUX的條件下,每天光照培養(yǎng)12小時;該伸長培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、0.5-2mg/L?BA、0.1-0.4mg/L的IAA、卡那霉素50-100mg/L和500mg/L的羧變青霉素構(gòu)成。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法,其特征在于:所述的植入生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)的方法為:待再生轉(zhuǎn)化芽生長到2-3cm長度時切下,在25-28℃溫度條件下,光強2500-5000LUX的條件下,植入生根培養(yǎng)基進行培養(yǎng),每天光照培養(yǎng)12小時;該生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基、0.2-0.4mg/L的IAA、50-100mg/l卡那霉素和500mg/L的羧變青霉素構(gòu)成。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效番茄基因轉(zhuǎn)化方法,其特征在于:所述的生根移栽為:取出再生芽,沖洗掉培養(yǎng)基,將其栽到蛭石培養(yǎng)基內(nèi),澆MS營養(yǎng)液,保持每天3-4小時太陽光直射,在25-28℃溫度條件下培養(yǎng);當(dāng)生長出3-4個葉片時,然后入土栽培。
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專利技術(shù)附圖

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    專利證書

    專利利登記簿副本

安全保障

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    海量資源庫,平臺整合幾十萬閑置資源。
  • 交易保障

    完善的資金保障體系確保買賣雙方資金安全。
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    專業(yè)交易顧問全程服跟進,確保交易流暢。
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