本發(fā)明公開(kāi)了一種以橙色大白菜子葉段為外植體的離體組織培養(yǎng)方法。該方法在傳統(tǒng)大白菜組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)上首次采用了芽啟動(dòng)培養(yǎng)基和對(duì)子葉段末端的切割措施，優(yōu)化了橙色大白菜離體植株再生體系。該培養(yǎng)方法不需要添加AgNO、簡(jiǎn)單、易操作、成本低；同時(shí)，培養(yǎng)出來(lái)的不定芽質(zhì)量好、健壯、沒(méi)有畸形，提高了再生頻率，縮短了再生周期。為獲得大白菜轉(zhuǎn)基因的受體新材料提供了新的途徑，對(duì)利用現(xiàn)代基因工程技術(shù)創(chuàng)新大白菜種質(zhì)和新品種將具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1.一種以橙色大白菜子葉段為外植體的離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于，
包括下列步驟：
1)挑選籽粒飽滿的橙色大白菜種子，無(wú)菌條件下，先用體積百分比為70％
的酒精表面殺菌約1min，再用10％的NaClO溶液滅菌30～35min，然后用無(wú)
菌水反復(fù)沖洗4～5次，最后將種子平放于MS基本培養(yǎng)基表面，在溫度為25±1
℃，光照時(shí)間16h/d，光照強(qiáng)度2000lx的條件下培養(yǎng)；
2)當(dāng)幼苗直立生長(zhǎng)，兩片子葉較大、半直立將展平、呈綠色，第一片
真葉未露出時(shí)，在子葉柄基部和下胚軸交接處橫切，后沿子葉柄縱切去除頂
芽，并切除此子葉頂端的1/3的單片子葉為外植體；
3)先將子葉段以子葉的下端豎直向下插入芽啟動(dòng)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2～3d，
然后轉(zhuǎn)入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)10d，當(dāng)不定芽長(zhǎng)到3cm時(shí)，最后將誘導(dǎo)的不
定芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以上培養(yǎng)條件均為溫度25±1℃，光照時(shí)間16
h/d，光照強(qiáng)度2000lx；
4)待幼苗基部形成大量的毛根后，煉苗4～5d，取出小植株，洗凈根
部培養(yǎng)基，移栽到珍珠巖∶草炭體積比為1∶3混合基質(zhì)中，塑料薄膜保濕7
d，逐漸揭膜，10～15d即可入土栽培；
所述的芽啟動(dòng)培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)基中加入7.0mg.L^-16-BA和0.5
mg.L^-1NAA；
所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)基中加入5.5mg.L^-16-BA和0.5
mg.L^-1NAA；
所述的生根培養(yǎng)基是在1/2MS基本培養(yǎng)基中加入0.5mg.L^-1NAA。