本發明公開了一種三倍體矮牽牛的培育方法，包括以下步驟：選擇雜種優勢強的二倍體矮牽牛組合作為雜交親本，在父本開花期選擇適當大小的花蕾，用秋水仙素、氨磺靈和氟樂靈混合藥液進行化學誘變促使形成2n花粉，將2n花粉授粉到二倍體母本柱頭上得到F雜交種子，同時將父本沒有經化學誘變處理的n花粉與母本雜交得到對照二倍體F雜交種子。F雜交種子發育的成株與對照二倍體F雜交后代進行農藝性狀、解剖學比較，在此基礎上再進行染色體數目檢測，最終確定三倍體植株。本發明育種周期短、操作簡便誘變效率高，具有較好的應用前景。

1.一種三倍體矮牽牛的培育方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：
1) 選擇雜交優勢較強的二倍體組合作為親本，按常規技術種植；
2) 在親本進入花期時，用化學誘導劑誘導父本植株上的花蕾，使之產生2n花粉；
3) 誘導后花蕾縱軸長度生長至1.5cm~2.6cm時，采摘放置于低溫、干燥、黑暗處保存；
4) 雜交前對母本進行去雄處理，將步驟3）中誘導花蕾中的2n花粉取出，涂于母本去雄
花蕾的柱頭上，植株結實后得到F₁雜交種子；同時將父本沒有經過誘導處理的n花粉涂于母
本去雄花蕾的柱頭上，植株結實后得到對照二倍體F₁雜交種子；
5) 將F₁雜交種子生長至成植，篩選出三倍體植株；
所述的化學誘導劑為秋水仙素、氨磺靈和氟樂靈的混合藥液，其中秋水仙素的最終質
量濃度為0.1%～0.5％，氨磺靈最終質量濃度為20 mg﹒L^-1～50 mg﹒L^-1，氟樂靈最終質量濃
度為50 mg﹒L^-1～100 mg﹒L^-1。
2.根據權利要求1所述的一種三倍體矮牽牛的培育方法，其特征在于，所述步驟5）的篩
選方法為：將F₁雜交種、對照二倍體F₁雜交種按常規技術種植，成株后先進行農藝性狀、解剖
學比較，選擇多倍體特征明顯的植株，再進行細胞學染色體檢測確定三倍體植株。
3.根據權利要求1所述的一種三倍體矮牽牛的培育方法，其特征在于，所述步驟1）中雜
交優勢較強的二倍體組合是指F₁雜交后代的株高、冠幅、莖粗、葉面積、開花數的農藝性狀
超過雙親。
4.根據權利要求2所述的一種三倍體矮牽牛的培育方法，其特征在于，所述步驟5）中農
藝性狀為：葉片長度與寬度、葉面是否扭曲、莖粗、株高、冠幅、萼片長度與寬度、柱頭和花藥
大小、花瓣直徑、花瓣邊緣褶皺程度。
5.根據權利要求2所述的一種三倍體矮牽牛的培育方法，其特征在于，所述步驟5）中解
剖學觀察性狀有氣孔和花粉細胞，觀察氣孔方法為：將葉片背面表皮撕下，在顯微鏡下測量
表皮氣孔大小；觀察花粉細胞方法為：對成熟花粉進行染色，在顯微鏡鏡下測量成熟花粉細
胞大小。
6.根據權利要求2所述的一種三倍體矮牽牛的培育方法，其特征在于，所述步驟5）中細
胞學染色體檢測方法為：
取長度3.1~7.3mm的幼蕾，0.002mol﹒L^-18-羥基喹啉水溶液0~10℃預處理1~5小時，蒸餾
水沖洗3~5次后轉入卡諾氏固定液固定12~24小時，蒸餾水沖洗3~5次，1mol﹒L^-1HCl溶液50~
60℃水浴解離3~6分鐘，蒸餾水沖洗3~5次用濾紙吸干水，放入體積百分濃度45%醋酸溶液配
制的質量濃度1%的洋紅染色液染色12~24小時，用鑷子將幼蕾移入干凈的載玻片上，用刀片
切取雌蕊子房，用鑷子取子房中心部位少量分生組織，放置于載玻片上，滴1~2滴1%洋紅染
色液，壓片觀察統計體細胞染色體數目，篩選2n=3x=21的三倍體植株。
7.根據權利要求6所述的一種三倍體矮牽牛的培育方法，其特征在于，所述卡諾氏固定
液是由無水乙醇和冰醋酸按體積比3:1制成的。
8.根據權利要求6所述的一種三倍體矮牽牛的培育方法，其特征在于，所述體積百分濃
度45%醋酸溶液配制的質量濃度1%的洋紅染色液配制方法為：先加入45ml乙酸再加水55ml，
混勻后將洋紅粉末1克緩慢倒入100ml 45%醋酸溶液中，邊煮邊攪拌，煮沸冷卻后過濾即可
使用。