1.一種熒光探針檢測(cè)酶活性的方法，其特征在于：所述的熒光探針為式I或II所示的水
溶性共軛聚合物：
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其中，R1為
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Ar為苯基；
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其中，R2為
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B為苯二乙炔基(-C≡C-Ph-C≡C-)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熒光探針檢測(cè)酶活性的方法，其特征在于：為了淬滅式I
或II所示的化合物，使用的淬滅劑為：
Ar為苯基時(shí)，或B為苯二乙炔基時(shí)，使用選自對(duì)甲基紅、苯醌、蒽醌、硝基苯、多硝基苯、
芘、吖啶、熒光素、羅丹明、聯(lián)吡啶、卟啉中的一種作為淬滅劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熒光探針檢測(cè)酶活性的方法，所述的酶活性定量檢測(cè)方
法包括如下的步驟：
第一步，對(duì)酶底物進(jìn)行化學(xué)修飾：通過(guò)共價(jià)鍵合，在酶底物上連接一個(gè)與熒 光探針?biāo)?br/>匹配的淬滅劑基團(tuán)，得到修飾過(guò)的酶底物；
第二步，繪制標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)曲線：將修飾過(guò)的酶底物與上述的熒光探針?lè)磻?yīng)，完全淬滅熒光
探針的熒光：分批將第一步得到的修飾過(guò)的酶底物加入含有熒光探針的緩沖液中，修飾過(guò)
的酶底物與熒光探針通過(guò)靜電作用在緩沖液中形成靜電復(fù)合物并淬滅熒光，直至熒光探針
的熒光淬滅至99％以上，記錄此過(guò)程中酶底物濃度[Q]和熒光強(qiáng)度F，以F0/F-1為縱坐標(biāo)，
[Q]為橫坐標(biāo)，繪制Stern-Volmer淬滅曲線，以此作為標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)曲線，建立了熒光強(qiáng)度與酶
底物濃度的定量關(guān)系；
該淬滅曲線是直線的情況下，Stern-Volmer方程為：
F0/F-1＝Kapp[Q]
其中，F(xiàn)0是加入酶底物之前的熒光強(qiáng)度，
F是加入酶底物之后的熒光強(qiáng)度，
[Q]是混合液中酶底物濃度，
Kapp是表觀系數(shù)，為一常數(shù)值；
該淬滅曲線是拋物線的情況下，Stern-Volmer方程為：
F0/F-1＝A[Q]+B[Q]
2其中，F(xiàn)0是加入酶底物之前的熒光強(qiáng)度，
F是加入酶底物之后的熒光強(qiáng)度，
[Q]是混合液中酶底物濃度，
A、B為常數(shù)；
第三步，待測(cè)酶的活性分析：將不同濃度的修飾過(guò)的酶底物與熒光探針?lè)磻?yīng)后，分別加
入待測(cè)的酶，熒光信號(hào)隨著酶的加入量逐漸恢復(fù)，通過(guò)熒光發(fā)射光譜測(cè)定混合液的熒光強(qiáng)
度值，然后根據(jù)第二步得到的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)曲線將熒光強(qiáng)度值轉(zhuǎn)換為底物濃度值，并以此底物
濃度變化值為縱坐標(biāo)，反應(yīng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，在同一張圖上繪制不同底物濃度下的濃度變化
曲線，斜率即為反應(yīng)初速度；
再以反應(yīng)初速度的倒數(shù)為縱坐標(biāo)Y，酶底物初始濃度的倒數(shù)為橫坐標(biāo)X，繪制
Lineweaver-Burk曲線，該曲線接近直線，且符合方程：Y＝61.067+241.90445X，通過(guò)斜線的
橫截距-1/Km求出Km，計(jì)算出酶促反應(yīng)過(guò)程中某時(shí)刻在溶液中的酶底物的濃度，從而計(jì)算酶
的活性。
