本發明公開了一種比率熒光納米探針及其應用，其利用?CDs能夠專一性響應ClO的特性，以?CDs為熒光探針、以[Ru(bpy)]作為參比試劑，構建?CDs@[Ru(bpy)]比率熒光納米探針。當加入不同濃度ClO進行反應后，該比率熒光探針的熒光顏色由藍綠色逐漸過渡至紅色，故可用于ClO的定量或半定量檢測；同時，該比率熒光納米探針還能夠攝入細胞中，實現細胞成像，故可用于細胞內ClO活性氧自由基的可視化檢測。本發明具有操作簡單、適用性廣、反應快速、能夠產生多種色彩的顏色變化等優點，可對目標物進行多色彩、可視化、在線定量分析。

1.一種比率熒光納米探針，其特征在于：以m-CDs為熒光探針、以[Ru(bpy)₃]²⁺作為參比
試劑，構建m-CDs@[Ru(bpy)₃]²⁺比率熒光納米探針；
所述m-CDs是以間苯二胺為原料，乙醇為溶劑，在180 ℃下水熱反應12 h后，通過柱層
析色譜分離純化得到的；其中，間苯二胺與乙醇的質量體積比為1:100 g/mL；柱層析色譜分
離純化所用洗脫劑為二氯甲烷與甲醇的混合溶液，兩者體積比為15:1。
2.根據權利要求1所述的比率熒光納米探針，其特征在于：所述比率熒光納米探針的構
建方法為：將m-CDs溶液與Ru(bpy)₃Cl₂溶液按體積比6:1混合，制得所述m-CDs@[Ru(bpy)₃]²⁺
比率熒光納米探針；
其中，m-CDs溶液的濃度為20 μg/mL，Ru(bpy)₃Cl₂溶液的濃度為40 μg/mL。
3.一種如權利要求1所述比率熒光納米探針在定量檢測ClO^-中的應用，其特征在于：應
用方法包括以下步驟：
1）向所述比率熒光納米探針中分別加入系列濃度的ClO^-，混合反應5 min后測定其熒光
強度，并繪制熒光強度隨ClO^-濃度變化的標準曲線，得出回歸方程；
2）向另一比率熒光納米探針中加入含ClO^-的待測樣品，混合反應5 min后測定其熒光強
度，再利用步驟1）所得回歸方程計算出樣品中ClO^-的含量。
4.一種如權利要求1所述比率熒光納米探針在可視化檢測ClO^-中的應用，其特征在于：
應用方法包括以下步驟：
1）向所述比率熒光納米探針中加入瓊脂糖粉末，加熱攪拌后將所得粘稠狀膠體放置在
離心管蓋的凹槽處，待其冷卻后形成圓餅狀的m-CDs@[Ru(bpy)₃]²⁺瓊脂糖水凝膠；
2）向所得m-CDs@[Ru(bpy)₃]²⁺瓊脂糖水凝膠中分別加入系列濃度的ClO^-，反應5 min后
于365 nm紫外燈下觀察其熒光強度和顏色的變化，并同時使用數碼相機拍攝水凝膠的熒光
成像，以制備標準比色卡；
3）向另取的m-CDs@[Ru(bpy)₃]²⁺瓊脂糖水凝膠中加入含ClO^-的待測樣品，反應5 min后
于365 nm紫外燈下觀察其熒光強度和顏色，并與步驟2）所得標準比色卡進行對比，可視化
判斷樣品中ClO^-的含量；
所得m-CDs@[Ru(bpy)₃]²⁺瓊脂糖水凝膠中瓊脂糖的含量為5%。
5.一種如權利要求1所述比率熒光納米探針在細胞成像中的應用，其特征在于：用于細
胞內ClO^-活性氧自由基的檢測。
6.根據權利要求5所述比率熒光納米探針在細胞成像中的應用，其特征在于：其檢測方
法包括以下步驟：
1）將所述比率熒光納米探針加入裝有細胞的培養皿中，在95% CO₂/5% O₂的氛圍內培養
1 h后，用KRP緩沖液洗滌細胞3-5次，除去未進入細胞的比率熒光納米探針，采用共聚焦顯
微鏡在激發波長為488nm和543nm兩種通道下拍攝進行成像；
2）向步驟1）中攝入有比率熒光納米探針的細胞加入10 μM ClO^-，進一步孵化15 min后
用KRP緩沖液洗滌細胞3-5次，除去未進入細胞的ClO^-，采用共聚焦顯微鏡在激發波長為488
nm和543 nm兩種熒光通道下進行拍攝細胞成像，觀察m-CDs@[Ru(bpy)₃]²⁺比率熒光納米探
針對ClO^-的響應，以實現對ClO^-活性氧自由基的測定。