本發明公開了一種利用淺層培養生產藏紅花微球莖的方法，該方法包括(1)培養容器滅菌；(2)外植體的獲得及滅菌處理；(3)淺層培養的外植體的制備；(4)淺層培養；(A)叢生芽誘導；(B)微球莖形成；淺層培養階段又分叢生芽誘導和微球莖形成兩個過程。由于淺層培養采用的液體培養模式，培養體更易吸收培養基中的營養成分，所以種苗生長快，縮短了微球莖生產時間；同時淺層培養操作簡單，成本低，更容易實現規模化和工業化生產。

1.一種利用淺層培養生產藏紅花微球莖的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)培養容器滅菌：將培養基放入培養容器中，并在高溫高壓濕熱消毒滅菌后待用；
(2)外植體的獲得及滅菌處理：將藏紅花球莖放入含有消毒液的水中培養待其長出葉
片，取下葉片，清水沖洗20～40分鐘；在超凈臺中將上述藏紅花葉片進行表面消毒滅菌處
理；
(3)淺層培養的外植體的制備：將步驟(2)中已消毒滅菌的葉片在無菌環境下切成0.5
～1.0cm的小段，并接種到已滅菌的誘導藏紅花愈傷組織的固體培養基中，獲得藏紅花愈傷
組織；所述藏紅花愈傷組織即為淺層培養的外植體；
(4)淺層培養：
(A)叢生芽誘導：將步驟(3)中獲得的愈傷組織切成0.1～0.3cm³小塊接種到液體淺層叢
生芽誘導培養基中培養，培養時間為15～25d；
(B)微球莖形成：叢生芽誘導結束后，不移動組培苗及培養基，直接向組培瓶中添加誘
導微球莖形成的培養基，培養時間為30～45d；即獲得藏紅花叢生微球莖；所述步驟(2)中的
滅菌處理的具體步驟為：首先在75％無水乙醇中浸泡15～30s，再用無菌水清洗2～4次，然
后放入摩爾濃度為0.1％的升汞中浸泡3～5min，再用無菌水清洗5～8次；所述步驟(3)中的
誘導藏紅花愈傷組織的固體培養基的配方為：MS+0.5～1.5mg/L 6-BA+0.05～0.2mg/L NAA
+藏紅花汁液0.1～0.3g/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.5g/L，pH為5.6～6.0，培養時間為25～30d；所
述步驟(4)中的(A)步驟中的液體培養基的配方為：MS+1.5～2.5mg/L 6-BA+0.05～0.15mg/
L NAA+藏紅花汁液0.1～0.3g/L+蔗糖20g/L+AC0.1～0.3g/L，pH為5.6～6.0，將配制好的液
體培養基倒入組培瓶中，液面高度為0.2～0.5cm，滅菌后使用；所述步驟(4)中的(B)步驟中
的液體培養基的配方為：1/2MS+0.1～0.5mg/L IBA+0.05～0.2mg/L NAA+藏紅花汁液0.1～
0.3g/L+蔗糖30g/L，pH為5.6～6.0，將配制好的液體培養基滅菌后倒入組培瓶中，液面高度
為0.5～1.0cm。
2.根據權利要求1所述的利用淺層培養生產藏紅花微球莖方法，其特征在于，所述步驟
(3)中的誘導藏紅花愈傷組織培養的環境為：暗培養30～40d，溫度為19～22℃。
3.根據權利要求2所述的利用淺層培養生產藏紅花微球莖方法，其特征在于，所述步驟
(4)中的(A)步驟中叢生芽生長的培養環境為：首先進行暗培養，暗培養時間為10～15d；然
后進行光照培養，光照周期14h/d，光照強度1800～2000LX，培養時間為5～10d；所述培養環
境溫度為19～22℃。
4.根據權利要求2所述的利用淺層培養生產藏紅花微球莖方法，其特征在于，所述步驟
(4)中的(B)步驟中微球莖產生的培養環境為：光照周期14h/d，光照強度2000～2500LX，溫
度18～20℃。
5.根據權利要求1-4任項所述的利用淺層培養生產藏紅花微球莖方法，其特征在于，所
述藏紅花汁液的制備方法是鮮物研磨或榨汁。
6.根據權利要求5所述的利用淺層培養生產藏紅花微球莖方法，其特征在于，所述藏紅
花汁液的制作步驟為：將藏紅花球莖洗凈，除去皮膜，切成質量為1～5g的小塊，研缽研磨獲
得所述汁液。