本發(fā)明提供了一種基于魯米諾功能化的磁性免疫探針檢測(cè)甲胎蛋白的方法，屬于納米功能材料、生物傳感技術(shù)和電化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。磁性微球比表面積大、導(dǎo)電能力強(qiáng)，且分離方便。制備魯米諾功能化的磁性微球，利用其標(biāo)記甲胎蛋白二抗，從而制得魯米諾功能化的磁性免疫探針。在金電極表面構(gòu)建“甲胎蛋白一抗/甲胎蛋白抗原/魯米諾功能化的磁性免疫探針”式復(fù)合結(jié)構(gòu)，通過檢測(cè)電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)實(shí)現(xiàn)對(duì)甲胎蛋白抗原的靈敏、特異性檢測(cè)。目前常采用的酶標(biāo)記抗體法，其探針制備操作復(fù)雜且易降低酶的活性。與之比較，本發(fā)明中魯米諾功能化的磁性免疫探針標(biāo)記抗體制備簡(jiǎn)單方便、且易于保存，可用于檢測(cè)甲胎蛋白抗原。

1.一種魯米諾功能化的磁性免疫探針，由羧基修飾的磁性微球與魯米諾、甲胎蛋白二
抗鏈接而成；
所述魯米諾、甲胎蛋白二抗分別通過氨基和羧基反應(yīng)共價(jià)鏈接在所述的磁性微球表
面。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魯米諾功能化的磁性免疫探針，其特征在于：所述魯米諾功能
化的磁性免疫探針具有電致化學(xué)發(fā)光特性。
3.權(quán)利要求1～2中任一所述的魯米諾功能化的磁性免疫探針的制備方法，包括如下步
驟：
(1)將洗滌干凈的磁性微球加到1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀
酰亞胺的混合溶液中，攪拌狀態(tài)下得到活化的磁性微球；
(2)將步驟(1)得到的活化的磁性微球洗滌干凈，加到魯米諾和甲胎蛋白二抗的混合溶
液中，混合均勻后孵育，洗滌干凈，并用牛血清白蛋白封閉得到魯米諾功能化的磁性微球免
疫探針。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述磁性微球濃度為；1-(3-二甲氨基丙
基)-3-乙基碳二亞胺濃度為0.1M；N-羥基琥珀酰亞胺濃度為0.1M；魯米諾濃度為1.0×10-
4M；甲胎蛋白二抗?jié)舛葹?.02mg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述方法還包括將所述磁性微球通過
磁性分離洗滌的步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求3步驟(1)所述的磁性微球，其特征在于：用0.1M咪唑-鹽酸緩沖溶液
(pH＝7.0)洗滌三遍。
7.根據(jù)權(quán)利要求3步驟(2)所述的磁性微球，其特征在于：用0.01M磷酸緩沖溶液(pH＝
7.4)洗滌三遍。
8.一種基于魯米諾功能化磁性免疫探針檢測(cè)甲胎蛋白的方法，步驟包括：
(1)利用Au-S化學(xué)鍵，在金電極表面修飾巰基乙酸；
(2)在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺的作用下，將巰基乙
酸修飾的金電極與甲胎蛋白一抗反應(yīng)，并用封閉液封閉，制備甲胎蛋白一抗包被的金電極；
(3)將步驟(2)中制備的甲胎蛋白一抗包被的金電極依次與甲胎蛋白抗原標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)
本、魯米諾功能化的磁性微球免疫探針；
(4)在檢測(cè)池中加入電致化學(xué)發(fā)光反應(yīng)試劑；
(5)將步驟(3)制備的金電極插入到檢測(cè)池中，電致化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)
度。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述方法，其特征在于：步驟(1)中金電極為4mm金盤電極，巰基乙酸
濃度為1.0×10^-4M。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述方法，其特征在于：步驟(2)中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳
二亞胺濃度為0.1M，N-羥基琥珀酰亞胺濃度為0.1M，甲胎蛋白一抗?jié)舛葹?.01mg/mL，封閉
液為0.1％(m/v)牛血清白蛋白溶液。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述方法，其特征在于：步驟(4)中電致化學(xué)發(fā)光反應(yīng)試劑中過氧化
氫濃度為：1.0×10^-3M。