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一種檢測SNP位點的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-08
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201410778560.X 
  • 技術(專利)名稱 一種檢測SNP位點的方法 
  • 項目單位 中國科學院植物研究所
  • 發明人 漆小泉,趙素珍 
  • 行業類別 智慧健康-健康大數據
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 秦風怡
  • 發布時間 2021-10-08  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種檢測SNP位點的方法。本發明公開一組檢測SNP位點的探針,該探針由檢測各個SNP位點的各個探針組成,所述探針均由左區段和右區段組成。利用本發明公開的方法可以同時檢測多個SNP位點,徹底實現了操作簡便、高通量、低成本檢測SNP,使SNP作為DNA分子標記在實際應用中充分發揮其絕對的優勢。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一組檢測SNP位點的探針,該探針由檢測各個SNP位點的各個探針組成,所述探針均
    由左區段和右區段組成;所述左區段的序列從5’端到3’端依次為左通用引物序列和位于待
    測基因組上待測SNP位點的5’端上游、且與待測SNP位點相鄰的核苷酸序列;所述右區段的
    序列從5’端到3’端依次為待測SNP位點的核苷酸、位于待測基因組上待測SNP位點的3’端下
    游、且與待測SNP位點相鄰的核苷酸序列、可變區序列和右通用引物序列;
    所述各個SNP位點的各個探針的長度均不同,一種SNP位點對應一種長度;
    所述各個SNP位點的各個探針的左區段中,左通用引物序列均相同;
    所述各個SNP位點的各個探針的右區段中,右通用引物序列均相同;
    所述探針的退火溫度基本一致,以適合在同一條件下與相應的目標序列雜交。
    2.根據權利要求1所述的探針,其特征在于:所述SNP位點為同一個位點時,檢測該SNP
    位點的各個探針的左區段均相同;
    所述左通用引物序列如SEQ ID No.3中自5’端起第1位至第23位核苷酸所示;
    所述右通用引物序列如SEQ ID No.4中自5’端起第94位至第117位核苷酸所示。
    3.根據權利要求1或2所述的探針,其特征在于:所述可變區序列為SEQ ID No.1中的任
    一段序列。
    4.根據權利要求1或2所述的探針,其特征在于:所述左區段中,所述位于待測基因組上
    待測SNP位點的5’端上游、且與待測SNP位點相鄰的核苷酸序列的長度為20-30bp;
    所述右區段中,所述位于待測基因組上待測SNP位點的3’端下游、且與待測SNP位點相
    鄰的核苷酸序列的長度為20-30 bp。
    5.一種檢測SNP位點的試劑盒,該試劑盒包含如下1)或2)所述的分子:
    1)權利要求1-4任一所述的探針;
    2)權利要求1-4任一所述的探針的左區段、SEQ ID No.1所示的DNA分子和擴增含有權
    利要求1-4任一所述的探針的右區段的前體的引物對;
    所述權利要求1-4任一所述的探針的右區段的前體經限制性內切酶MlyI和切刻內切酶
    Nb.BtsI消化得到權利要求1-4任一所述的探針的右區段;
    該試劑盒還包含使用說明書,說明書的記載內容如下:將待檢測基因組序列與權利要
    求1-4任一所述的探針進行雜交,得到雜交產物;在雜交產物中加入DNA連接酶對雜交產物
    進行連接,使得探針的左區段與右區段連接,得到連接產物;以連接產物為模板,以左通用
    引物序列和右通用引物序列為引物進行PCR擴增,得到PCR擴增產物;根據PCR擴增產物的長
    度與所述探針的長度是否一致判斷SNP位點處堿基種類;
    或,
    以SEQ ID No.1所示的DNA分子為模板,以擴增權利要求1-4任一所述的探針的右區段
    的前體的引物對為引物進行PCR擴增,得到右區段的前體,將該前體經限制性內切酶MlyI和
    切刻內切酶Nb.BtsI消化得到權利要求1-4任一所述的探針的右區段;該右區段與左區段組
    成探針;將待檢測基因組序列與探針進行雜交,得到雜交產物;在雜交產物中加入DNA連接
    酶對雜交產物進行連接,使得探針的左區段與右區段連接,得到連接產物;以連接產物為模
    板,以左通用引物序列和右通用引物序列為引物進行PCR擴增,得到PCR擴增產物;根據PCR
    擴增產物的長度與所述探針的長度是否一致判斷SNP位點處堿基種類;
    所述左通用引物序列為權利要求1-4任一所述的探針的左區段的左通用引物序列;
    所述右通用引物序列為權利要求1-4任一所述的探針的右區段的右通用引物序列。
    6.一種檢測SNP位點的方法,包括如下步驟:將待測基因組與權利要求1-4任一所述的
    探針的左區段和右區段進行雜交,得到雜交產物;在雜交產物中加入DNA連接酶,對雜交產
    物進行連接,使得探針的左區段與右區段連接,得到連接產物;以連接產物為模板,用所述
    探針中所述左通用引物序列和所述探針中所述右通用引物序列為引物進行PCR擴增,得到
    PCR擴增產物;根據PCR擴增產物的長度和探針的長度是否一致判斷SNP位點處核苷酸種類。
    7.根據權利要求6所述的方法,其特征在于:所述探針的右區段的制備方法如下:以SEQ
    ID No.1所示的DNA分子為模板,以擴增權利要求1-4任一所述的探針的右區段的前體的引
    物對為引物進行PCR擴增,得到右區段的前體,將該前體經限制性內切酶MlyI和切刻內切酶
    Nb.BtsI消化得到單鏈,即得。
    8.一種制備權利要求1-4任一所述的探針中的右區段的方法,包括如下步驟:以SEQ ID
    No.1所示DNA分子為模板,以右區段的前體的引物對為引物進行PCR擴增,得到右區段的前
    體,將該前體經限制性內切酶MlyI和切刻內切酶Nb.BtsI消化得到單鏈,即得。
    9.SEQ ID No.1所示的DNA分子。
    10.權利要求1-4任一所述的探針、權利要求5所述的試劑盒或權利要求9所述的DNA分
    子在檢測SNP位點中的應用。
    展開

專利技術附圖

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