本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)DNA的方法，其原理是以魯米諾還原氯金酸，得到魯米諾膠體金納米粒子LumAuNPs，以探針DNA修飾LumAuNPs，得化學(xué)發(fā)光探針；然后以磁珠為載體固定發(fā)卡結(jié)構(gòu)的捕獲DNA，在目標(biāo)物DNA存在時(shí)，捕獲DNA的發(fā)卡結(jié)構(gòu)被打開，并在化學(xué)發(fā)光探針上的探針DNA的雜交作用下，通過催化發(fā)卡自組裝技術(shù)將化學(xué)發(fā)光探針連接在磁珠表面；經(jīng)過磁分離后，再加入羥胺?O?磺酸，以LumAuNPs—羥胺?O?磺酸為化學(xué)發(fā)光體系，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光測(cè)定，根據(jù)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA的測(cè)定。方法具有簡(jiǎn)單、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)。

1.一種化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)DNA的方法，其特征在于以魯米諾還原氯金酸，得到魯米諾膠體金納米粒子LumAuNPs，以探針DNA修飾LumAuNPs，得化學(xué)發(fā)光探針；然后以磁珠為載體固定發(fā)卡結(jié)構(gòu)的捕獲DNA，在目標(biāo)物DNA存在時(shí)，捕獲DNA的發(fā)卡結(jié)構(gòu)被打開，并在化學(xué)發(fā)光探針上的探針DNA的雜交作用下，通過催化發(fā)卡自組裝技術(shù)將化學(xué)發(fā)光探針連接在磁珠表面；經(jīng)過磁分離后，再加入羥胺-O-磺酸，以LumAuNPs—羥胺-O-磺酸為化學(xué)發(fā)光體系，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光測(cè)定，根據(jù)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA的測(cè)定，具體步驟為：(1)魯米諾膠體金納米粒子的制備：實(shí)驗(yàn)開始前，將所用的玻璃儀器用王水浸泡24h后，用二次蒸餾水沖洗，放入烘箱烘干；取一定量的1％的氯金酸溶液加去離子水稀釋成0.02％的氯金酸溶液并置于三口燒瓶中，在磁力攪拌下加熱回流煮沸；待溶液沸騰后，快速加入0.01mL～5mL 0.01M的魯米諾溶液，繼續(xù)加熱煮沸，溶液的顏色由淺黃色變?yōu)楹谏詈笞兂删萍t色，40min后停止加熱，并在繼續(xù)攪拌下冷卻至室溫，得魯米諾膠體金納米粒子，即LumAuNPs，將制得的LumAuNPs轉(zhuǎn)移到棕色廣口瓶中，4℃下保存?zhèn)溆茫?2)捕獲DNA修飾磁珠的制備：取10μL～100μL羧基化磁珠溶液放入1.5mL離心管中，用10μL～200μL濃度為0.1M咪唑緩沖液洗滌三次，然后分散到0.01mL～2mL含有0.1M EDC和0.05M NHS的0.1M咪唑緩沖液的中，在37℃條件下，振蕩反應(yīng)30min；然后向離心管中加入10μL～200μL濃度為5.0×10^-8M捕獲DNA，在37℃條件下振蕩過夜，得到捕獲DNA修飾磁珠，然后再用2.0mL 0.1M PBS緩沖溶液清洗三次，最后分散到2.0mL PBS緩沖溶液中，4℃保存；(3)探針DNA修飾LumAuNPs的制備：將1μL～20μL的TCEP加到10μL～200μL濃度為1.0×10^-6M的探針DNA溶液中，37℃振蕩活化1小時(shí)，再取100μL～1000μL合成好的LumAuNPs加入到該溶液中，在37℃條件下震蕩過夜，然后再加入10μL～200μL含0.3M NaCl pH 8.2的10mMTris-HCl緩沖液；繼續(xù)震蕩48h后，在12000rpm的條件下離心30min后，將紅色沉淀用1mL pH7.4的0.1M PBS緩沖溶液清洗，再次離心，如此重復(fù)三次，得探針DNA修飾LumAuNPs，即化學(xué)發(fā)光探針；最后得到的化學(xué)發(fā)光探針分散到1000μL pH 7.4的0.1M PBS緩沖溶液中，4℃保存?zhèn)溆茫?4)目標(biāo)DNA的檢測(cè)：取10μL～200μL捕獲DNA修飾磁珠溶液置于離心管中，然后取10μL～100μL含目標(biāo)DNA的溶液加入到此離心管中，37℃條件下震蕩反應(yīng)40min，然后再加入10μL～100μL探針DNA修飾LumAuNPs溶液，37℃條件下震蕩反應(yīng)40min，通過目標(biāo)DNA與捕獲DNA的作用、探針DNA與目標(biāo)DNA和捕獲DNA的作用，化學(xué)發(fā)光探針連接在磁珠表面；經(jīng)過磁分離后，將磁性分離物分散在50μL pH 7.4 0.1M PBS緩沖溶液中，然后再加入羥胺-O-磺酸溶液，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，根據(jù)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度定量，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA的測(cè)定。2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)DNA的方法，其特征在于所述的DNA序列如下：所述的DNA序列為：捕獲DNA：5`-ATATACGCCATGTAGCATTCGGT TAGG CGTAT ATT TG C TT-NH<sub>2</sub>-3`；目標(biāo)DNA：5`-AATATACGCCTAACCG-3`；探針DNA：5`-SH-TATA CGCCTAACCGAATGCT TACCACGCGTAT AG C A T CCGA-3` 。3.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)DNA的方法，其特征在于所述的DNA由上海生工生物工程有限公司合成。