本發(fā)明提供一種基因芯片的金沉積檢測(cè)方法，其特征在于所述方法包括將已知的DNA序列點(diǎn)樣到微陣列上制備基因芯片，在待測(cè)核酸的5’端預(yù)先修飾一種生物大分子，以及在納米金上標(biāo)記與待測(cè)核酸上修飾分子匹配的另一生物大分子構(gòu)建納米金復(fù)合探針，然后將修飾好的待測(cè)核酸和標(biāo)記好的所述納米金復(fù)合探針與所述基因芯片混合，孵育，洗去未反應(yīng)的所述納米金復(fù)合探針，加入雙氧水金增強(qiáng)反應(yīng)液觀察。本發(fā)明提供的基因芯片的金沉積檢測(cè)方法最大的特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)為：靈敏度高，檢測(cè)方便，操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，成本低，目視化檢測(cè)，檢測(cè)及信號(hào)讀取設(shè)備依賴程度低。

1.一種基因芯片的金沉積檢測(cè)方法，所述的方法包括將已知的DNA序
列點(diǎn)樣到微陣列上制備基因芯片，在待測(cè)核酸的5’端預(yù)先修飾一種生物大分
子，以及在納米金上標(biāo)記與待測(cè)核酸上修飾分子匹配的另一生物大分子構(gòu)建
納米金復(fù)合探針，然后將修飾好的待測(cè)核酸和標(biāo)記好的所述納米金復(fù)合探針
與所述基因芯片混合，孵育，洗去未反應(yīng)的所述納米金復(fù)合探針，加入雙氧
水金增強(qiáng)反應(yīng)液觀察，其特征在于，具體的檢測(cè)步驟為：
①采用芯片點(diǎn)樣儀將5’端氨基修飾的DNA探針點(diǎn)陣于醛基化修飾芯片表
面制備基因芯片，置于密閉空間固定，所述DNA探針序列為：
分枝桿菌通用探針：5’-NH₂-ggactgagatacggcc-3’；
結(jié)核分枝桿菌探針：5’-NH₂-cacgggatgcatgtct-3’；
龜分枝桿菌探針：5’-NH₂-ccacacacttcatggtga-3’；
胞內(nèi)分枝桿菌探針：5’-NH₂-gacctttaggcgcatg-3’；
②PCR擴(kuò)增獲得標(biāo)記有生物素的DNA分子，其中，引物的序列為：
16s1：5’-Biotin-gataagcytgggaaactg-3’,其中y代表c/t；
16s2：5’-Biotin-tgcctcccgtaggagtctgg-3’；
③通過(guò)K₂CO₃將納米金溶液調(diào)pH值至6，加入鏈親和素溶液，混勻，再加
入聚乙二醇溶液，離心，洗去未標(biāo)記上的鏈親和素，制得標(biāo)記有鏈親合素的納
米金復(fù)合探針；
④取所述步驟②中制備的經(jīng)過(guò)標(biāo)記的DNA分子，滴于所述步驟①中制備的
基因芯片的點(diǎn)樣區(qū)，雜交，洗去未雜交的DNA分子，然后將所述步驟③中制備
的標(biāo)記好的納米金復(fù)合探針滴于芯片點(diǎn)樣區(qū)，反應(yīng)30～60min，洗液清洗去除未
反應(yīng)的納米金復(fù)合探針；
⑤將雙氧水金增強(qiáng)反應(yīng)液滴在點(diǎn)陣區(qū)，室溫靜置，肉眼或顯微鏡下觀察
；所述的雙氧水金增強(qiáng)反應(yīng)液的組成為次氯金酸1～100mM、雙氧水0.5～4M
和質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1～10％的明膠。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金沉積檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟③中
還包括采用納米金重懸液重懸標(biāo)記有鏈親合素的納米金復(fù)合探針，所述納米
金重懸液的組成為：牛血清白蛋白0.25～10％、聚乙烯吡咯酮0.1～1％、蔗糖
1.5～10％、聚乙二醇0.01～1％、吐溫0.2～1％，以上組成均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金沉積檢測(cè)方法，其特征在于，所述雙氧水金
增強(qiáng)反應(yīng)液的組成為：次氯金酸10mM、雙氧水1.5M和質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為4％的
明膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金沉積檢測(cè)方法，其特征在于，納米金上標(biāo)記
核酸序列時(shí)，所述核酸序列為兩種長(zhǎng)度的DNA探針GP1和GP2，且GP1的
堿基長(zhǎng)度比GP2長(zhǎng)10個(gè)堿基以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的金沉積檢測(cè)方法，其特征在于，當(dāng)納米金的尺
寸為5～40nm時(shí)，GP1與GP2的比例在1∶4～1∶30之間。