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梨小食心蟲熒光PCR檢測方法與應用

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-08
  • 技術成熟度:正在研發(fā)
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201410536526.1 
  • 技術(專利)名稱 梨小食心蟲熒光PCR檢測方法與應用 
  • 項目單位 中華人民共和國庫爾勒出入境檢驗檢疫局
  • 發(fā)明人 王鳳軍,馮俊麗,華鵬,張祥林,張偉,郭鐵群,劉永杰,王鵬舉 
  • 行業(yè)類別 智慧健康-健康大數(shù)據(jù)
  • 技術成熟度 正在研發(fā)
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 衛(wèi)瀝瑟
  • 發(fā)布時間 2021-12-08  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明公開了一種梨小食心蟲實時熒光PCR檢測方法,包括以下步驟:①、待鑒定樣品基因組DNA的提取;②、實時熒光定量PCR擴增體系設置:以基因組DNA為擴增模板,用特異性引物和探針,進行實時熒光PCR檢測;③、擴增結果分析及結果判斷。探針為:Probe:5’?(FAM)CGAAATCTTAATACTTCATTTTTTGACCCTG(TAMRA)?3’。本發(fā)明能用于有效地從蛀果性害蟲(包括梨小食心蟲、蘋果蠹蛾和香梨優(yōu)斑螟等)中區(qū)分出梨小食心蟲。
    展開
  • 02

    說明書

    1.梨小食心蟲實時熒光PCR檢測方法,其特征是:
    檢測中所用特異性引物和探針的核苷酸分別為:
    特異性引物為:
    F-Primer:5’-CAGCTCTTTTATTACTACTTTCACTACCA-3’
    R-Primer:5’-AATAGGATCTCCTCCTCCT-3’;
    探針為:
    Probe:5’-(FAM)CGAAATCTTAATACTTCATTTTTTGACCCTG(TAMRA)-3’。
    2.根據(jù)權利要求1所述的梨小食心蟲實時熒光PCR檢測方法,其特征是包括以下步驟:
    ①、待鑒定樣品基因組DNA的提取;
    ②、實時熒光定量PCR擴增體系設置:
    以基因組DNA為擴增模板,用上述特異性引物和探針,進行實時熒光PCR檢測;
    ③、擴增結果分析及結果判斷。
    3.根據(jù)權利要求2所述的梨小食心蟲實時熒光PCR檢測方法,其特征是:
    探針的5’端標記有報告熒光染料,根據(jù)所采用的實時熒光PCR儀的配置而定,所述報告
    熒光染料為FAM、HEX、JOE、VIC、NED、FITC、CY3或CY5,探針的3’端標記有淬滅熒光染料,所述
    淬滅熒光染料為TAMRA、ROX、dabcy1、BHQ或ECLIPSE。
    4.根據(jù)權利要求2或3所述的梨小食心蟲實時熒光PCR檢測方法,其特征是:
    所述步驟②實時熒光定量PCR擴增體系設置為:
    25μL總體積中含有10×PCR Buffer 2.5μL,2.5mM、each的dNTP2μL,10μM的上下游引物
    各0.5μL,10μM的探針0.5μL,500U Taq DNA聚合酶0.25μL和DNA模板2μL,補水至25μL。
    5.根據(jù)權利要求4所述的梨小食心蟲實時熒光PCR檢測方法,其特征是:
    實時熒光PCR擴增條件為:95℃預處理15s,再以95℃變性5s,60℃退火/延伸34s,進行
    40個循環(huán),在每個循環(huán)的60℃退火/延伸階段收集熒光信號。
    6.根據(jù)權利要求5所述的梨小食心蟲實時熒光PCR檢測方法,其特征是:
    所述步驟③的擴增結果分析及結果判斷為:根據(jù)樣品擴增出具有指數(shù)增長型的熒光擴
    增曲線,當其Ct值小于35,且陰性對照和空白對照無熒光信號,說明該樣品受到梨小食心蟲
    污染,否則不是梨小食心蟲污染;當檢測樣品Ct值小于35,但陰性對照/空白對照有熒光信
    號,說明該檢測結果不可信,整個檢測過程需要重新做。
    7.根據(jù)權利要求6所述的梨小食心蟲實時熒光PCR檢測方法,其特征是:
    所述步驟①的梨小食心蟲待檢樣品的DNA的提取可采用CTAB法、SDS法、高鹽低pH法或
    試劑盒法進行提取。
    展開

專利技術附圖

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