本發(fā)明涉及生物芯片領(lǐng)域，具體涉及表面等離子體共振免疫傳感芯片及其制備方法與應(yīng)用。所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片是通過(guò)在固相載體固定蝦原肌球蛋白、蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水或蝦原肌球蛋白單克隆抗體作為生物探針，利用金膜產(chǎn)生表面等離子體共振響應(yīng)，利用自組裝單分子層技術(shù)在金膜表面修飾巰基，芯片活化后在生物芯片上固定探針得到的；該生物芯片可應(yīng)用于蝦原肌球蛋白單克隆抗體或檢測(cè)蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水的檢測(cè)和過(guò)敏原（蝦原肌球蛋白）的檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、不需要標(biāo)記、成本低、設(shè)備簡(jiǎn)單、對(duì)環(huán)境無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，有望實(shí)現(xiàn)大量樣品的現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)。

1.一種表面等離子體共振免疫傳感芯片的制備方法，其特征在于包含如下步驟：(1)在玻璃基底上沉積厚度為40～60nm的金膜作為表面等離子體共振免疫傳感芯片的固相載體；(2)在培養(yǎng)皿中注入含有HS(CH₂)₁₀COOH和HS(CH₂)₆OH的乙醇溶液，對(duì)金膜表面進(jìn)行化學(xué)修飾；然后注入PBS緩沖液清洗，洗掉未結(jié)合物質(zhì)；氮?dú)獯蹈桑?3)將上述固相載體固定在SPR檢測(cè)儀上；(4)流通池中通入PBS緩沖液清洗，待基線穩(wěn)定后加入N-羥基琥珀酰亞胺和N-乙基-N’-(二甲氨基丙基)碳二亞胺的混合液活化芯片；然后通入PBS緩沖液清洗；(5)在生物芯片表面固定蝦原肌球蛋白、蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水或蝦原肌球蛋白單克隆抗體，記錄表面等離子體共振角的變化，監(jiān)測(cè)生物探針固定的過(guò)程,當(dāng)共振角不再升高時(shí)，探針固定過(guò)程結(jié)束；然后通入PBS緩沖液清洗；(6)加入乙醇胺溶液封閉滅活剩余的酯鍵；然后通入PBS緩沖液清洗，得到表面等離子體共振免疫傳感芯片；步驟(4)中所述的N-羥基琥珀酰亞胺的終濃度為0.05mol/L；所述的N-乙基-N’-(二甲氨基丙基)碳二亞胺的終濃度為0.05mol/L；步驟(5)中所述的蝦原肌球蛋白的濃度為0.105mg/mL；所述的蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水是將效價(jià)為15000的蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水稀釋100倍得到的；所述的蝦原肌球蛋白單克隆抗體的濃度為0.0042mg/mL。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的玻璃基底為直徑20mm、厚度1mm的圓形玻璃片；所述的金膜厚度為50nm；步驟(2)中所述的HS(CH₂)₁₀COOH的終濃度為1mM；所述的HS(CH₂)₆OH的終濃度為9mM；步驟(2)中所述的化學(xué)修飾的條件為37℃溫浴，避光反應(yīng)2h；步驟(2)所述的氮?dú)獯蹈傻臏囟葹?0℃；步驟(4)中所述的活化芯片的時(shí)間為15min；步驟(5)中所述的蝦原肌球蛋白的分子量為36kD；所述的固定時(shí)間為30?min；步驟(6)中所述的乙醇胺溶液的濃度為1mol/L，pH值為8.5；所述的封閉滅活的時(shí)間為6min；步驟(2)、(4)、(5)和(6)中所述的PBS緩沖液清洗的次數(shù)為3次，每次清洗的時(shí)間為2min；所述的PBS緩沖液的組成如下：終濃度為2mmol/L的NaH₂PO₄、終濃度為2mmol/L的Na₂HPO₄、終濃度為150mmol/L的NaCl和水，pH值為7.4。3.一種表面等離子體共振免疫傳感芯片，其特征在于由權(quán)利要求1或2所述方法制備得到。4.權(quán)利要求3所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片在生物芯片領(lǐng)域中的應(yīng)用。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片在生物芯片領(lǐng)域中的應(yīng)用，其特征在于：包括利用表面等離子體共振免疫傳感芯片檢測(cè)蝦原肌球蛋白單克隆抗體或檢測(cè)蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水的應(yīng)用和利用表面等離子體共振免疫傳感芯片檢測(cè)蝦原肌球蛋白的應(yīng)用。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片在生物芯片領(lǐng)域中的應(yīng)用，其特征在于：所述的利用表面等離子體共振免疫傳感芯片檢測(cè)蝦原肌球蛋白單克隆抗體或檢測(cè)蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水的應(yīng)用，包含如下步驟：(一)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：已知濃度的蝦原肌球蛋白單克隆抗體或已知效價(jià)的蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水用PBS緩沖液配置成不同濃度或稀釋倍數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以PBS緩沖液為基準(zhǔn)，各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液分別通入表面等離子體共振儀的微流通池，與表面等離子體共振免疫傳感芯片上的探針發(fā)生免疫反應(yīng)，對(duì)芯片反應(yīng)區(qū)進(jìn)行表面等離子體共振掃描，記錄SPR共振角的變化，獲得各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的表面等離子共振動(dòng)力學(xué)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度作為橫坐標(biāo)，共振角作為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，并進(jìn)行多項(xiàng)式曲線擬合，獲得回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線；(二)未知樣品的檢測(cè)：將未知樣品注入微流通池與表面等離子體共振免疫傳感芯片上的探針發(fā)生免疫反應(yīng)，對(duì)芯片反應(yīng)區(qū)進(jìn)行表面等離子體共振掃描，記錄SPR共振角的變化，獲得未知樣品的表面等離子體共振動(dòng)力學(xué)曲線，結(jié)合步驟(一)得到的回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出未知樣品中蝦原肌球蛋白單克隆抗體的濃度或未知蝦原肌球蛋?白單克隆抗體腹水的稀釋倍數(shù)；(三)下一樣品的檢測(cè)：步驟(二)中的免疫反應(yīng)檢測(cè)結(jié)束后，微流通池先通入PBS緩沖液清洗1～5次，每次清洗的時(shí)間是1～5min；再通入SDS-HCl溶液清洗1～3次，每次清洗時(shí)間是1～3min；使抗原-抗體結(jié)合物解離；然后通入PBS緩沖液1～5次，每次清洗的時(shí)間是1～3min；SPR響應(yīng)值降回基線，繼續(xù)檢測(cè)下一個(gè)樣品。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片在生物芯片領(lǐng)域中的應(yīng)用，其特征在于：步驟(一)中所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片的探針為蝦原肌球蛋白；步驟(一)中所述的蝦原肌球蛋白單克隆抗體標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍為1μg/mL～4.2mg/mL；所述的蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水稀釋倍數(shù)范圍為10～150倍；步驟(一)所述的標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢測(cè)量為100μL；所述的免疫反應(yīng)的反應(yīng)時(shí)間為3min；所述的表面等離子體共振掃描范圍為1～2°；步驟(二)中所述的未知樣品的檢測(cè)量為100μL；所述的免疫反應(yīng)的反應(yīng)時(shí)間為3min；所述的表面等離子體共振掃描范圍為1～2°；步驟(三)中所述的SDS-HCl溶液中SDS的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％，HCl的濃度為0.01mol/L；步驟(三)中所述的PBS緩沖液清洗次數(shù)為3次，每次清洗的時(shí)間為3min；所述的PBS緩沖液的組成如下：終濃度為2mmol/L的NaH₂PO₄、終濃度為2mmol/L的Na₂HPO₄、終濃度為150mmol/L的NaCl和水，pH值為7.4。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片在生物芯片領(lǐng)域中的應(yīng)用，其特征在于：利用表面等離子體共振免疫傳感芯片檢測(cè)蝦原肌球蛋白的應(yīng)用包含如下步驟：(Ⅰ)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：已知濃度的蝦原肌球蛋白用PBS緩沖液配置成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以PBS緩沖液為基準(zhǔn)，各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液分別通入表面等離子共振儀的微流通池，與表面等離子體共振免疫傳感芯片上的探針發(fā)生免疫反應(yīng)，對(duì)芯片反應(yīng)區(qū)進(jìn)行表面等離子體共振掃描，記錄SPR共振角的變化，獲得各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的表面等離子共振動(dòng)力學(xué)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度作為橫坐標(biāo)，共振角作為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，并進(jìn)行多項(xiàng)式曲線擬合，獲得回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線；(Ⅱ)未知樣品的檢測(cè)：將未知樣品通入微流通池與表面等離子體共振免疫傳感芯片上的探針發(fā)生免疫反應(yīng)，對(duì)芯片反應(yīng)區(qū)進(jìn)行表面等離子體共振掃描，記錄SPR共振角的變化，獲得未知樣品的表面等離子體共振動(dòng)力學(xué)曲線，結(jié)合步驟(Ⅰ)得到的回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出未知樣品中蝦原肌球蛋白的濃度；(Ⅲ)下一樣品的檢測(cè)：步驟(Ⅱ)中的免疫反應(yīng)結(jié)束后，微流通池先通入PBS緩沖液清洗1～5次，每次清洗的時(shí)間是1～5min；再通入SDS-HCl溶液清洗1～3次，每次清洗時(shí)間是1～3min；使抗原-抗體結(jié)合物解離；然后通入PBS緩沖液1～5次，每次清洗的時(shí)間是1～3min；SPR響應(yīng)值降回基線，繼續(xù)檢測(cè)下一個(gè)樣品。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片在生物芯片領(lǐng)域中的應(yīng)用，其特征在于：步驟(Ⅰ)中所述的表面等離子體共振免疫傳感芯片的探針為蝦原肌球蛋白單克隆抗體腹水或蝦原肌球蛋白單克隆抗體；步驟(Ⅰ)中所述的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍為1μg/mL～2.1mg/mL；步驟(Ⅰ)所述的標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢測(cè)量為100μL；所述的免疫反應(yīng)的反應(yīng)時(shí)間為3min；所述的表面等離子體共振掃描范圍為1～2°；步驟(Ⅱ)中所述的未知樣品的檢測(cè)量為100μL；所述的免疫反應(yīng)的反應(yīng)時(shí)間為3min；所述的表面等離子體共振掃描范圍為1～2°；步驟(Ⅲ)中所述的SDS-HCl溶液中SDS的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％，HCl的濃度為0.01mol/L；步驟(Ⅲ)中所述的PBS緩沖液清洗次數(shù)為3次，每次清洗的時(shí)間為3min；所述所述的PBS緩沖液的組成如下：終濃度為2mmol/L的NaH₂PO₄、終濃度為2mmol/L的Na₂HPO₄、終濃度為150mmol/L的NaCl和水，pH值為7.4。