本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻對捕食性天敵草間鉆頭蛛安全性評價方法,由三級營養(yǎng)試驗，蛋白傳遞規(guī)律，捕食功能反應(yīng)以及種群密度與種群動態(tài)比較4個部分組成。通過草間鉆頭蛛的食物鏈評價轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻對草間鉆頭蛛的影響；采用ELISA檢測手段鑒定草間鉆頭蛛暴露于Bt蛋白的途徑和程度；評價轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻對該非靶標(biāo)生物捕食功能的影響；通過比較轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻與非轉(zhuǎn)基因親本對照，評價對草間鉆頭蛛種群的影響。最終，根據(jù)4方面數(shù)據(jù)綜合評價轉(zhuǎn)基因作物的種植對該非靶標(biāo)生物產(chǎn)生的生態(tài)后果。本發(fā)明建立了一套系統(tǒng)、科學(xué)的評價方法，對完善轉(zhuǎn)基因作物對非靶標(biāo)生物的影響研究以及確定轉(zhuǎn)基因作物種植的生態(tài)安全性具有重要意義。

1.轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻對捕食性天敵草間鉆頭蛛安全性評價方法，其特征在于包括
如下4個部分：
(1)三級營養(yǎng)試驗：通過水稻—褐飛虱—草間鉆頭蛛的食物鏈評價轉(zhuǎn)Bt基因抗
蟲水稻通過獵物介導(dǎo)對草間鉆頭蛛的安全性影響；
草間鉆頭蛛二齡幼蛛于指型管中單頭飼養(yǎng)，管口塞以棉花，管底放一吸水海棉，
分別以不同水稻材料稻苗飼養(yǎng)的褐飛虱若蟲作為食物飼喂草間鉆頭蛛，發(fā)育前期用
低齡若蟲，發(fā)育后期用高齡若蟲，每日提供充足的食物與水源，并觀察草間鉆頭蛛
的蛻皮與存活情況，直至死亡或發(fā)育為成蛛；待草間鉆頭蛛發(fā)育成熟，用萬分之一
電子天平稱重，然后雌雄配對，記錄其產(chǎn)卵前期及第一個卵袋的含卵量；每個水稻
材料處理供試草間鉆頭蛛150頭；
選擇草間鉆頭蛛的幼蛛發(fā)育歷期、產(chǎn)卵前期、成蛛體重以及第一個卵袋含卵量
作為評價參數(shù)指標(biāo)，并進(jìn)行統(tǒng)計分析，評價由褐飛虱若蟲介導(dǎo)的轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻
對草間鉆頭蛛的安全性影響；
(2)蛋白傳遞規(guī)律：通過ELISA檢測手段鑒定草間鉆頭蛛暴露于Bt蛋白的途徑
和程度；
于玻璃罐中分別放入15日齡不同水稻品種、系的稻苗，接入對應(yīng)水稻材料飼養(yǎng)
的褐飛虱若蟲及草間鉆頭蛛雌成蛛，取食5天后，分別對水稻葉鞘，褐飛虱若蟲，
草間鉆頭蛛進(jìn)行取樣，葉鞘30±1mg，褐飛虱若蟲30±1mg，草間鉆頭蛛10頭；
每個處理重復(fù)4～5次；
采用ELISA技術(shù)，分別對以上樣品中Bt蛋白的含量進(jìn)行檢測，確定通過食物
鏈草間鉆頭蛛暴露于Bt蛋白的程度；
(3)捕食功能反應(yīng)：通過比較轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻與非轉(zhuǎn)基因親本對照品種稻田
采集的草間鉆頭蛛捕食功能參數(shù)，評判轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻對草間鉆頭蛛的影響；
于種植不同水稻材料的稻田分別采集25頭大小相似的健康草間鉆頭蛛雌成蛛，
試驗之前只給草間鉆頭蛛雌成蛛提供水，不提供獵物，使其饑餓24小時；在玻璃管
底部放置含水海棉，移入4根15日齡稻苗，按照5、10、20、30、40頭/管的密度
接入已在不同水稻材料上飼養(yǎng)的1～2齡褐飛虱若蟲，再放入1頭草間鉆頭蛛雌成蛛，
每個密度處理重復(fù)5次，24小時后考察各玻璃管中的褐飛虱被捕食的情況；
選擇草間鉆頭蛛的瞬時攻擊率和處理獵物時間作為評價參數(shù)指標(biāo)，并進(jìn)行統(tǒng)計
分析，評價轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻對草間鉆頭蛛捕食功能反應(yīng)的影響；
(4)種群密度與種群動態(tài)比較：通過比較轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻與非轉(zhuǎn)基因親本對
照稻田草間鉆頭蛛的發(fā)生動態(tài)，評價轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻的種植對草間鉆頭蛛種群的
影響；
采用對角線取樣法，每小區(qū)面積為150m²，每次取5個樣，每樣0.25m²，6叢
稻株；水稻移栽后30天開始用吸蟲器取樣，至水稻收割前10天，共取樣5～7次；
取樣立即用75％的酒精保存，在體視鏡下進(jìn)行鑒定并計數(shù)，以統(tǒng)計草間鉆頭蛛種群
密度及種群動態(tài)，并對不同水稻稻田之間參數(shù)的差異性進(jìn)行統(tǒng)計分析，評價轉(zhuǎn)Bt
基因抗蟲水稻對草間鉆頭蛛田間種群的安全性影響。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻對捕食性天敵草間鉆頭蛛安全性評價
方法，其特征在于轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻選擇轉(zhuǎn)cry2Aa基因水稻T2A-1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻對捕食性天敵草間鉆頭蛛安全性評價
方法，其特征在于轉(zhuǎn)cry2Aa基因水稻T2A-1于長×寬×高＝25cm×20cm×3
cm的栽培盤中以Yoshida營養(yǎng)液培育至15cm高。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻對捕食性天敵草間鉆頭蛛安全性評價
方法，其特征在于草間鉆頭蛛二齡幼蛛于2cm×12cm指型管中單頭飼養(yǎng)。