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大腸桿菌外膜蛋白TolC核酸適配體的序列及用途

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-15
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201410333620.7 
  • 技術(專利)名稱 大腸桿菌外膜蛋白TolC核酸適配體的序列及用途 
  • 項目單位 湖南中醫藥大學
  • 發明人 李杰,陳伶利,葛金文 
  • 行業類別 醫藥制造-中藥飲片
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 楊颯
  • 發布時間 2022-02-15  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及大腸桿菌外膜蛋白TolC核酸適配體的序列及用途。本發明采用基因重組質粒表達大腸桿菌表面蛋白TolC,通過SELEX過程篩選與其特異性結合的核酸適配體群,測序分析適配體群的堿基序列。該序列可作為大腸桿菌表面蛋白TolC的特異性結合的探針,用于設計和制備大腸桿菌快速檢測標識物及外排泵抑制劑等。
    展開
  • 02

    說明書

    1.特異結合大腸桿菌外膜蛋白TolC的核酸適配體,所述核酸適配體如SEQ ID NO:4所
    示序列。
    2.按權利要求1所述的適配體,其特征在于,所述大腸桿菌外膜蛋白TolC采用如下方
    法純化得到:
    采用分子克隆技術,根據大腸桿菌外膜蛋白TolC的基因組序列設計特異引物,所述特
    異引物之上游引物Pa為5’-CGGGATCCATGAAGAAATTGCTCCCCATTCTT‐3’,其下游引物Pb為5’
    ‐CCGCTCGAGGTTACGGAAAGGGTTATGACCGTT‐3’,以全長cDNA為模板,PCR擴增,得到目的基
    因經Bam H I和Xho I雙酶切,同樣處理PET-30a質粒,再用T4連接酶連接制得含有TolC
    基因的重組質粒;重組質粒轉化感受態細胞BL21,從轉化的平板挑單克隆到液體培養基中培
    養,IPTG誘導表達,經固液分離,取沉淀經超聲粉碎,然后電泳;再采用柱層析純化所述大
    腸桿菌外膜蛋白TolC。
    3.按權利要求1或2所述的適配體,其特征在于,所述序列為人工合成的序列,或任何
    其他來源的同樣的序列。
    4.一種權利要求1-3中任一項所述的適配體在制備檢測TolC蛋白的探針中的應用。
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專利技術附圖

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