本發明公開了一種用于中國地方豬品種大腸桿菌抗性的分子標記方法與應用。是用miRNA?215前體序列中的AT插入突變作為中國地方豬品種大腸桿菌抗性的分子標記及其檢測方法與應用，檢測該分子標記的方法包括待測樣品的豬基因組DNA的提取及整個miRNA?215前體序列的PCR擴增，miRNA?215前體序列的PCR經SSCP分析，當待測豬個體基因型為BB型(出現4條帶中間的第2和第3這2條帶，在miR?215前體序列6bp處存在2個堿基(AT)的插入突變)，則為大腸桿菌抗性強的個體。本發明為中國地方豬品種大腸桿菌性腹瀉抗病育種工作的分子標記輔助選擇，為提高仔豬腹瀉抗病力提供了一種有效的分子標記育種手段。從根本上降低腹瀉病的發病率。

1.一種用于中國地方豬品種大腸桿菌抗性的分子標記方法，其特征在于，包括以下步
驟：
1）提取待測樣本的耳組織DNA；
2）以提取的基因組DNA為模板進行PCR擴增，擴增片段包含miRNA-215前體序列，擴增片
段長度203 bp，上下游引物序列為：
上游引物為：5’- CTGTTCAGTCGCTTTAGAAA -3’
下游引物為：5’- CATCTACCATTGTGTTGCTT -3’；
3）擴增產物用SSCP方法進行分析，如說明書附圖1標號5、8、9所示，出現4條帶的為AB
型；如說明書附圖1標號1、3、4、6、7所示，出現4條帶中的第1和第4兩條帶的為AA型；如說明
書附圖1標號2所示，出現4條帶中的第2和第3兩條帶的為BB型，選擇BB型的樣本作為大腸桿
菌抗性強的個體。
2.根據權利要求1所述的分子標記方法，其特征在于，待測樣本選擇梅山豬或/和東串
豬，每個個體采取耳組織樣約1.0 g，放入1.5 mL的離心管內，置-20 ℃存放；采用常規酚-
氯仿法提取基因組DNA，超純水溶解后用NanoDrop-1000微量核酸測定儀測定其濃度和純
度，根據其濃度用超純水稀釋成100 mg/μL，-20 ℃保存備用。
3.根據權利要求1所述的分子標記方法，其特征在于，所述PCR擴增反應體系為20 μL：
基因組DNA濃度為100 ng/μL，1.0 μL，PCR Master-Mix 10.0 μL，上下游引物濃度為10
pmol/L，各1.0 μL，加ddH₂O補足至20 μL；反應條件為：95℃預變性5 min，95℃變性30 s，60
℃退火30 s，72℃延伸30 s，35個循環，72℃延伸10 min，最后4℃保存備用。
4.權利要求1-3中任一所述的分子標記方法在豬抗大腸桿菌病育種過程中進行標記輔
助選擇的應用。