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一種去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體及包含它的重組體系

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-04
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201511023762.4 
  • 技術(專利)名稱 一種去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體及包含它的重組體系 
  • 項目單位 南京林業大學
  • 發明人 張瑜,周亦琛,王飛,李迅,徐徐 
  • 行業類別 醫藥制造-化學藥品制劑
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 李彩云
  • 發布時間 2022-02-04  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體及包含它的重組體系。去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體,其DNA序列如SEQ NO:1所示。與現有技術相比,本發明所提供的去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體(M52A突變體)具有降低蛋白穩定性和可化學誘導重新獲得蛋白穩定性的特性,其四級結構并未發生明顯變化,仍為球形殼狀結構;野生型鐵蛋白Tm(50%蛋白質發生變性的溫度)為69.9℃,而突變體M52A的Tm僅為54.3℃,與氯化血紅素化學誘導后其Tm恢復為67.7℃,因此,該突變體因其具有可調控的溫度穩定性,可作為一種通過小分子誘導控制溫度穩定性的蛋白質納米載體。
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  • 02

    說明書

    1.一種去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體,其特征在于:其DNA序列如SEQ NO:1所示,去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體是將第52位蛋氨酸突變為丙氨酸。2.如權利要求1所述的去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體,其特征在于:其氨基酸序列如SEQ NO:2所示,且該序列第52位由蛋氨酸突變為丙氨酸。3.權利要求1或2所述的去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體的制備方法,其特征在于:其擴增的引物對為:上游引物:5’-ATCGATGAAGCGAAACATGCAGATCG-3’下游引物:5’-GCTTTCATGGTATTCCACATCGTTCAG-3’。4.如權利要求3所述的制備方法,其特征在于:其純化方法包括順序相接的如下步驟:(1)挑取含重組質粒pET32Ek/LIC-M52A的大腸桿菌搖菌培養,當培養至OD600達到0.6,30℃下用終濃度0.5mM IPTG誘導3h;(2)離心收集菌體并洗滌;(3)用Ni-NTA親和柱純化:向洗滌后的菌體中加入1×Binding Buffer重懸菌體,超聲破碎菌液后離心,然后取離心液通過0.22μm水系膜過濾后上樣,用10mM咪唑洗脫去除雜蛋白,最后用15mM咪唑洗脫液收集目標蛋白洗脫,最后在25℃溫度下用2U/μL腸激酶酶切20h,即可獲得目標蛋白。5.權利要求1或2所述的去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體恢復穩定性的化學誘導方法,其特征在于:將血紅素與去除血紅素的大腸桿菌鐵蛋白突變體以摩爾比1:10均勻混合,在25℃下誘導36h。6.一種重組體系,其特征在于:在所述的重組體系上克隆有如SEQ NO:1所示的DNA序列;所述的重組體系包括重組質粒和重組菌。
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專利技術附圖

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