本發(fā)明涉及一種在大腸桿菌中高效表達(dá)的人乳頭瘤病毒16型L2N120E7E6重組蛋白的密碼子優(yōu)化基因，將其插入原核表達(dá)載體pET9a，優(yōu)化基因獲得高效表達(dá)，表達(dá)水平占全菌的50％，表達(dá)蛋白經(jīng)純化后免疫小鼠，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該蛋白與未經(jīng)優(yōu)化基因表達(dá)的蛋白具有相同的免疫原性，可誘發(fā)特異性的IFN-γ的釋放，腫瘤生長(zhǎng)抑制動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明蛋白免疫對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)有明顯抑制作用，其中90％小鼠腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)完全抑制。該優(yōu)化基因建立的L2N120E7E6重組蛋白原核高效表達(dá)系統(tǒng)能用于HPV16感染和相關(guān)宮頸癌的預(yù)防和治療疫苗的中試生產(chǎn)及新藥研發(fā)。

1.一種人乳頭瘤病毒（HPV）16型L2N120E7E6融合蛋白，其特征在于，
所述融合蛋白的氨基酸序列為SQE?ID?NO.2所示的序列。
2.一種用于編碼權(quán)利要求1所述的人乳頭瘤病毒（HPV）16型
L2N120E7E6融合蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列為SQE?ID?
NO.1所示的序列。
3.一種大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒載體，其特征在于，所述的質(zhì)粒載體是由權(quán)利
要求2所述的HPV16型L2N120E7E6基因插入至質(zhì)粒pET9a的Nde?I和BamH?I
位點(diǎn)之間來構(gòu)建的。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒載體，其特征在于，所述的
大腸桿菌是BL21（DE3）。
5.一種用于生產(chǎn)權(quán)利要求1所述的人乳頭瘤病毒（HPV）16型
L2N120E7E6融合蛋白的大腸桿菌菌株，其特征在于，所述大腸桿菌菌株含
有權(quán)利要求3所述的質(zhì)粒載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的大腸桿菌菌株，其特征在于，所述的大腸桿菌
為BL21（DE3）。
7.一種制備權(quán)利要求1所述的人乳頭瘤病毒（HPV）16型L2N120E7E6
融合蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
1）將權(quán)利要求2所述的HPV16L2N120E7E6基因插入大腸桿菌表達(dá)載體
pET9a的NdeI和BamHI位點(diǎn)，將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌獲得含有
pET9a16L2N120E7E6的菌株，接種培養(yǎng)，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)；
2）表達(dá)菌體經(jīng)離心裂解后，收獲包涵體，用8M尿素懸起，離心，取上
清用CM柱純化表達(dá)蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述的大腸桿菌是BL21
（DE3）。
9.一種制備用于治療人乳頭瘤病毒16型感染及宮頸癌的藥物的方法，其
特征在于，所述方法包括，將權(quán)利要求5或6所述的大腸桿菌菌株用于發(fā)酵生
產(chǎn)L2N120E7E6融合蛋白。
10.權(quán)利要求1所述的人乳頭瘤病毒（HPV）16型L2N120E7E6融合蛋白
在制備用于治療人乳頭瘤病毒16型感染及宮頸癌的藥物中的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為疫苗。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于所述疫苗具有治療作用。
13.權(quán)利要求2所述的人乳頭瘤病毒（HPV）16型L2N120E7E6融合蛋白
的基因在制備用于治療人乳頭瘤病毒16型感染及宮頸癌的藥物中的應(yīng)用。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為疫苗。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其特征在于所述疫苗具有治療作用。
16.權(quán)利要求3-4任一項(xiàng)所述的大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒載體在制備用于治療
人乳頭瘤病毒16型感染及宮頸癌的藥物中的應(yīng)用。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為疫苗。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其特征在于所述疫苗具有治療作用。
19.權(quán)利要求5-6任一項(xiàng)所述的大腸桿菌菌株在制備用于治療人乳頭瘤
病毒16型感染及宮頸癌的藥物中的應(yīng)用。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為疫苗。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的應(yīng)用，其特征在于所述疫苗具有治療作用。
22.一種用于治療宮頸癌的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括權(quán)利要求1
所述的人乳頭瘤病毒（HPV）16型L2N120E7E6融合蛋白。