本發(fā)明提供一種人結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞系及其制備方法和應(yīng)用，所述細(xì)胞系為保藏號(hào)為CGMCC No.5558的人結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞系P6C，所述細(xì)胞系的制備方法，包括以下步驟：1)分離原代結(jié)腸癌干細(xì)胞；2)原代結(jié)腸癌干細(xì)胞的體外培養(yǎng)；3)結(jié)腸癌干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定；4)將步驟3)獲得的結(jié)腸癌干細(xì)胞再次按與步驟1)、2)和3)相同的方法分離、培養(yǎng)篩選表達(dá)CD44膜蛋白的腫瘤干細(xì)胞系所述細(xì)胞系的應(yīng)用為其在制備用于誘導(dǎo)腫瘤形成的藥物、用于腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物和篩選抗腫瘤發(fā)生、抗腫瘤生長(zhǎng)和抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。

1.一種表達(dá)CD44膜蛋白的人結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞系，所述細(xì)胞系為
保藏號(hào)為CGMCC?No.5558的人結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞系P6C。
2.一種人結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞系P6C的指示細(xì)胞系，所述細(xì)胞系通
過將Otc3/4啟動(dòng)子連接EGFP基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染于權(quán)利要求1所述的細(xì)胞系
而得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞系的制備方法，包括以下步驟：
1)分離原代結(jié)腸癌干細(xì)胞：取結(jié)腸癌組織剪碎后，消化獲得單細(xì)胞
懸液，再加入小鼠抗人EpCAM?Alexa?Fluor647單抗和小鼠抗人CD44FITC
單抗孵育；再用無菌流式細(xì)胞分選技術(shù)分離出原代結(jié)腸癌細(xì)胞；
2)原代結(jié)腸癌干細(xì)胞的體外培養(yǎng)：稀釋步驟1)獲得的原代細(xì)胞，接
種于96孔板中進(jìn)行培養(yǎng)；
3)結(jié)腸癌干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定：當(dāng)原代細(xì)胞形成的懸浮球狀克隆直
徑達(dá)到0.5毫米時(shí)，離心去上清，再將其消化后，以1：5的比例重新接種
到新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液中，篩選體內(nèi)成瘤能力和體外克隆形成能力的P6C細(xì)
胞；
4)將步驟3)獲得的結(jié)腸癌干細(xì)胞再次按與步驟1)、2)和3)相同
的方法分離、培養(yǎng)篩選表達(dá)CD44膜蛋白的腫瘤干細(xì)胞系P6C，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，還包括將
Otc3/4啟動(dòng)子連接EGFP基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染于步驟4)獲得的腫瘤干細(xì)胞系。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞系或權(quán)利要求3或4所述的方法制
得的細(xì)胞系在制備用于腫瘤形成或轉(zhuǎn)移腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞系或權(quán)利要求3或4所述的方法制
得的細(xì)胞系在制備篩選抗腫瘤發(fā)生、腫瘤生長(zhǎng)或腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)
用。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤為皮下腫
瘤或原位腫瘤。