1.一種用于檢測萊克多巴胺的量子點免疫熒光試劑盒,包括量子點標記的特異性抗
體;
所述抗體是通過以式Ⅰ所示的化合物與載體蛋白的偶聯物為免疫原得到的;
![]()
式Ⅰ;
所述式Ⅰ所示的化合物的制備方法是由如下步驟制得而成:
取500mg萊克多巴胺,溶于45ml甲醇中,加入348.8mg 6-溴己酸和233mg氫氧化鉀,加熱
至80℃回流反應40~72小時,點板確定原料大部分轉化;減壓濃縮:使用15ml復溶,使用制備
薄層色譜板分離純化,展開劑DCM:ME=4:1,以萊克多巴胺標準定位,取比其極性大的點,使
用甲醇提取,濃縮即得RAC-BBAR,得到的干物質即為半抗原;
所述式Ⅰ所示化合物與載體蛋白結合的偶聯物的制備方法包括如下步驟:
取RAC-BHAR半抗原160mg溶于10.7mlDMF中,攪拌使之充分溶解,加入EDC 221.75mg和
NHS 191.4mg,室溫反應3h;稱取144.1mg BSA溶于15ml 0.1M 碳酸緩沖溶液,pH=9.6,中,攪
拌10min,充分溶解;將步驟1的活化液3.6ml,在冰水浴環境下逐滴加入到蛋白溶液中,邊加
邊攪拌,室溫400rpm磁力攪拌反應24h;將反應產物裝入一個蒸餾水沖洗干凈的15cm透析
袋,1L 1×,pH7.2 PB室溫100rpm攪拌透析3d,每天換液3次,共計換液9次,將透析產物
4500rpm離心6min,0.5ml/管分裝,將抗原編號,-20℃保存備用;
所述量子點標記的特異性抗體是通過如下方法制備獲得的:
①取2.5mg量子點,用pH4.7、0.1M的MES緩沖液洗滌,然后用1ml pH4.7、0.1M的MES緩沖
液重懸,加入0.96mg EDC和1.15mg NHS,37℃反應30分鐘,20000rpm離心5min,收集沉淀,即
為活化后的量子點;
②取步驟①得到的活化后的量子點,用pH8.5、50mM的硼砂緩沖液洗滌,然后將2.5mg活
化后量子點、所述蛋白質含量為0.15mg的抗體和pH8.5、50mM的硼砂緩沖液混勻,總體積為
0.8ml,25℃反應3.5小時;
③取完成步驟②的液相,加入BSA并使其質量百分含量為5%,37℃反應30分鐘,
20000rpm離心5min,收集沉淀,用pH7.4、0.02M的PBS緩沖液洗滌,用1ml pH7.4、0.02M的PBS
緩沖液重懸;
④取步驟③得到的液相,用pH7.4、0.02M的PBS緩沖液稀釋至150000倍體積。
2.權利要求1所述一種用于檢測萊克多巴胺的量子點免疫熒光試劑盒,其特征在于,它
包括:包被有萊克多巴胺抗原的微孔板、萊克多巴胺標準溶液、稀釋液、濃縮洗滌液、抗體工
作液。