1.基于氧化透明質酸-II型膠原和自體濃縮骨髓有核細胞的關節軟骨修復材料，其特
征在于，由氧化透明質酸、II型膠原蛋白和自體濃縮骨髓有核細胞制成；氧化透明質酸、II
型膠原蛋白和自體濃縮骨髓有核細胞的加入量按每2×106個自體濃縮骨髓有核細胞加入
100mg II型膠原蛋白凝膠和10 μL 濃度為100mg/mL 的氧化透明質酸溶液；
所述II型膠原蛋白由以下方法制備：將凍干軟骨粉按質量體積比為20:1（g：L）用濃度
為4 M鹽酸胍溶液攪拌混懸，攪拌后置于4 ℃條件下，消化軟骨粉基質中的粘多糖至勻漿狀
態；消化完全后，將消化產物在4℃、8000rpm條件下離心20 min，棄上清液，收集沉淀物，加
水溶解，然后加入相當于鹽酸胍溶液體積3/50倍的醋酸，加入相當于凍干軟骨粉重量0.1倍
的胃蛋白酶，加水至終體積為鹽酸胍溶液的2倍，調節pH值于2.5-3之間，然后在4℃條件下
消化48 h；消化完畢后于立式高速離心機中8000 rpm離心20 min，棄沉淀，收集上清液；接
著向上清液中緩慢倒入濃度為1.5 M的 NaOH溶液并攪拌至pH值為7.5時停止倒注，加入
NaCl使其終濃度為3 M，4℃條件下，8000 rpm離心20 min，收集沉淀物；沉淀物分裝至透析
袋中待透析液電導率，接近純水電導率時結束透析；將透析袋內粘稠膠狀溶液在4℃條件
下，立式高速離心機8000 rpm離心20 min，收集沉淀物至無菌容量瓶中，加入0.15 mol/L的
鹽酸溶液，溶解3天后白色沉淀蛋白分散、溶解呈凝膠狀，攪拌均勻，分裝，凍干，備用；
所述氧化透明質酸由以下方法制備：配制成質量分數為2%的透明質酸溶液，然后加入
0.1g/mL 的高碘酸鈉溶液，攪拌，避光條件下完全氧化反應6小時，然后加入乙二醇終止反
應，再將反應液灌入透析袋中至電導率接近純水時結束透析，獲得氧化透明質酸；
所述自體濃縮骨髓有核細胞由以下方法制備：對目前動物進行麻醉，然后用已經使用
1000 U/mL 肝素預濕的注射器抽取骨髓血，然后將抽取的抗凝骨髓液加入等體積的無菌
PBS液，混勻，混勻后將骨髓液沿管壁緩慢注入到含等體積的濃度為1.073 g/mL 的Percoll
胞分離液中，注入過程保持分離液與混合液體之間界面的完整，接著采用Percoll密度梯度
離心法獲取自體濃縮骨髓有核細胞，先以2000 rpm的速度離心混合液體15 min，吸取有核
細胞層，加入 PBS溶液洗滌吸取的有核細胞，以1500 rpm的速度離心洗滌細胞5 min，棄上
清；再次加入PBS吹打洗滌細胞，1000 rpm速度離心5 min，棄上清，加入 PBS重懸即得。
2.根據權利要求1基于氧化透明質酸-II型膠原和自體濃縮骨髓有核細胞的關節軟骨
修復材料，其特征在于：所述100mg/mL 的氧化透明質酸由每100 mg氧化透明質酸加入1 mL
PBS溶液，經完全溶解制得。
3.權利要求1~2任一項所述基于氧化透明質酸-II型膠原和自體濃縮骨髓有核細胞的
關節軟骨修復材料的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：將自體濃縮骨髓有核細胞先與
II型膠原蛋白混合，然后再加入氧化透明質酸進行交聯。
4.權利要求1~2任一項所述關節軟骨修復材料在制備關節軟骨修復材料中的應用。
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